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      在工作中看蛋白質(zhì)
      
			
      
				2018-12-10 16:46:35
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      成像單個熒光標(biāo)記的大分子可以揭示其他實驗根本不能的活動細節(jié)。然而，在生理濃度下，背景熒光經(jīng)常壓倒來自單個分子的信號。
      

      來自哈佛大學(xué)的科學(xué)家團隊，包括沙特阿拉伯國王阿卜杜拉科技大學(xué)(KAUST)的Satoshi Habuchi，開發(fā)了一種新技術(shù)PhADE(光活化，擴散和激發(fā))，克服了背景熒光問題。
      

      在工作中看蛋白質(zhì)
      

      感興趣的蛋白質(zhì)用一種熒光蛋白標(biāo)記，當(dāng)被特定波長的光脈沖擊中時，該熒光蛋白可以改變其發(fā)射特性。然后將蛋白質(zhì)加入已固定在微流體流動池中的結(jié)合底物上。在表面附近的一部分熒光蛋白光活化后，快速擴散消除了任何可能引起背景熒光的未結(jié)合蛋白，僅留下與底物形成鍵的分子。然后可以在熒光激發(fā)下觀察這些單獨的分子相互作用。
      

      研究人員使用PhADE來研究DNA復(fù)制的動力學(xué)。對Fen1的單個分子進行成像，這是一種參與將DNA片段連接在一起的酶，與固定的DNA相互作用，它們能夠測量復(fù)制進行的速率，復(fù)制起始的頻率和Fen1的半衰期。
      

      作者強調(diào)PhADE的廣泛潛在應(yīng)用，因為它可以設(shè)想用于檢測具有多種可能的熒光團的任何蛋白質(zhì)。“我們希望PhADE將成為研究復(fù)雜生化反應(yīng)動力學(xué)的一種廣泛使用的方法，特別是在蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì) - 核酸相互作用較弱但無法用常規(guī)單分子工具成像的情況下，”約翰內(nèi)斯沃爾特說，他是該研究的資深作者之一。
      
			

			
        
      
			
      
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