基因運(yùn)載體有哪些?什么是基因運(yùn)載體?
想必大家都知道,“基因剪刀”指CRISPR基因編輯技術(shù),用它能像在電腦上編輯文章一樣,精確查找一串代碼在基因組中的位置,進(jìn)行刪除或修改。那么,你知道什么是基因運(yùn)載體嗎?
在基因操作過(guò)程中使用運(yùn)載體有兩個(gè)目的:
一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中去;
二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量的復(fù)制(稱為克隆)。
常用的運(yùn)載體主要有兩類:
一類是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的質(zhì)粒,它是一種相對(duì)分子質(zhì)量較小、獨(dú)立于擬核區(qū)DNA之外的環(huán)狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千堿基對(duì)),有的一個(gè)細(xì)菌中有一個(gè),有的一個(gè)細(xì)菌中有多個(gè)。質(zhì)粒能通過(guò)細(xì)菌間的接合由一個(gè)細(xì)菌向另一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移,可以獨(dú)立復(fù)制,也可整合到細(xì)菌擬核DNA中,隨著擬核DNA的復(fù)制而復(fù)制。
另一類運(yùn)載體是噬菌體或某些病毒等。
除以上兩類外,人們還在不斷尋找新的運(yùn)載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運(yùn)載體。
作為運(yùn)載體必須具有四個(gè)條件:
①在受體細(xì)胞中能保存下來(lái)并能大量復(fù)制;
②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn),而且每種酶切位點(diǎn)最好只有一個(gè),如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識(shí)別位點(diǎn),可適于多種限制酶切割的DNA插入;
③有一定的標(biāo)記基因,便于進(jìn)行篩選。如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標(biāo)記基因。
④對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害。
一般來(lái)說(shuō),天然運(yùn)載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對(duì)運(yùn)載體進(jìn)行人工改建?,F(xiàn)今實(shí)際所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過(guò)改建的。
值得一提的是,運(yùn)載體(Vector),一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中去;二是利用它在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量的復(fù)制(稱為克隆)。最終在受體細(xì)胞中表達(dá)大量目的基因產(chǎn)物,經(jīng)分離純化被人們利用。
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