·252·

廣東醫(yī)學(xué)

2012

年

1

月第

33

卷第

2

期

GuangdongMedicalJournalJan．2012，Vol．33，No．2

培養(yǎng)法主動免疫治療不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)

56

例

11211111張智

，

張珍

，

高天旸

，

李楠

，

李亞紅

，

嚴(yán)芳

，

李澤泳

，

邱厚匡

2

1廣東省第二人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心

，

生殖中心

（

廣州

510317）

【

摘要

】

目的探討淋巴細(xì)胞分離后直接注射與經(jīng)培養(yǎng)后注射對不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)

（UHA）

患者進(jìn)行主動

選擇

124

例

UHA

患者

，

取患者丈夫或無血緣關(guān)系的健康第三者靜脈血淋巴細(xì)胞于

經(jīng)治療后第

1

組成功率為

91.3%，

主動免疫治療

UHA

的臨床療

免疫治療的臨床療效

。

方法

孕前

、

孕中注射入患者前臂

，

使之產(chǎn)生主動免疫

。124

例患者平均分成兩組

，

第

1

組分離淋巴細(xì)胞直接注射

；

第

2

組分離淋巴細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)

5～7d

后注射

，

獲得

109

例妊娠隨訪結(jié)果

。

結(jié)果

提高效率

。

效顯著

。

培養(yǎng)法可簡化療程

，

【

關(guān)鍵詞

】

習(xí)慣性流產(chǎn)

；

培養(yǎng)法

；

免疫治療

第

2

組成功率為

91.7%，

兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義

（P＞0.05），

無畸形兒

。

結(jié)論

不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)

（UHA）

是指連續(xù)發(fā)生

3

次或

3

次以上的流產(chǎn)

，

其發(fā)生率約為

1%，

是常見的妊娠并

主要有遺傳

、

內(nèi)分泌

、

子宮發(fā)癥之一

。UHA

病因復(fù)雜

，

異常

、

感染

、

免疫等因素

，

其中免疫因素占

50%～60%。

目前國內(nèi)治療此類患者以常規(guī)中藥安胎保胎治療為

主

，

療效不一［1］

Y

染體缺失

）；

前列腺檢查

；

感染性疾病檢查型分析

、

（

乙型肝炎

、

丙型肝炎

、

庚型肝炎

、

單純皰疹病毒

、

巨細(xì)

胞病毒

、

梅毒

、

艾滋病

）；

性傳播疾病檢查

（

淋病

、

解脲

支原體

、

沙眼衣原體

、

尖銳濕疣

）。

1．4．2

女方染體核型分析

；

盆腔

B

超

、

子宮輸卵

管造影

、

診斷性刮宮

；

內(nèi)分泌功能檢查

（

性激素六項(xiàng)

：

黃

促卵泡激素

、

雌二醇

、

孕酮

、

泌素

、

睪酮以體生成素

、

及甲狀腺功能檢查

）；

傳染性疾病檢查

（

弓形蟲

、

風(fēng)疹

病毒

、

單純皰疹病毒

、

巨細(xì)胞病毒

，

解脲支原體和沙眼

抗衣原體

）；

自身免疫性疾病檢查

（

抗子宮內(nèi)膜抗體

、

心磷脂抗體

、

抗精子抗體

、

抗卵巢抗體

、

抗

HCG

抗體

、

ENA

七項(xiàng)

、

抗核抗體

、

抗

dsDNA

抗體

、

抗

ABO

血型抗

體

）；

封閉抗體檢查

。

。

主動免疫治療原理是采用小劑量父

使母體產(chǎn)生針對父系抗原的封系抗原反復(fù)免疫母體

，

閉抗體

，

維持正常妊娠周期

。

我們自

2006

年以來

，

對

對

UHA

患者進(jìn)行習(xí)慣性流產(chǎn)病例建立常規(guī)病因篩查

，

主動免疫治療

，

并比較淋巴細(xì)胞直接注射以及經(jīng)培養(yǎng)

有望使療程簡化及標(biāo)后注射對

UHA

患者的療效

，

準(zhǔn)化

。

1

1．1

資料與方法

一般資料本研究對象為我院生殖中心

2006

年

1．5

1．5．1

治療方法

淋巴細(xì)胞制備夫妻雙方對主動免疫治療有

10

月至

2010

年

12

月連續(xù)流產(chǎn)

3

次或

3

次以上患者

，

年齡

22～37

歲

，

平均

（26.65±2.96）

歲

；

流產(chǎn)時孕周為

5～10

周

，

平均

（6.5±1.32）

周

，

診斷為習(xí)慣性流產(chǎn)

232

例

，

有

124

例未找到明顯病因

，

診斷為

UHA。

將

124

例

患者平均分兩組

，

組間年齡

、

孕史等差異無統(tǒng)計學(xué)意義

（P＞0.01）。

見表

1。

表

1

組別

第

1

組

第

2

組

例數(shù)

62

62

兩組患者一般情況比較

x±s

珋

樂意接受治療并簽訂知情同意書

。

主動免充分了解

，

疫原首選丈夫淋巴細(xì)胞

，

亦可為無關(guān)的健康個體

。

抽

取供者外周血

20～30mL

肝素抗凝

，

用生理鹽水等體

積稀釋

，

取淋巴細(xì)胞分離液置于滅菌離心管內(nèi)

，

將丈夫

分離液與血液體積比為血沿管壁緩慢加入離心管

，

1∶2，

離心分離淋巴細(xì)胞

。

用無菌吸管輕輕吸取中間白

膜層

，

生理鹽水洗滌

3

次

。

1．5．2

免疫方法7第

1

組直接將總數(shù)約

（2～4）×10

年齡

（

歲

）

27．14±2．87

26．16±3．04

流產(chǎn)次數(shù)

（

次

）

流產(chǎn)時孕周

（

周

）

4．69±1．13

4．72±1．06

6．7±1．29

6．3±1．35

的淋巴細(xì)胞懸液

2～3mL，

在女方左右手臂皮內(nèi)注射

，

共

6～8

個點(diǎn)

。

第

2

組將收集的淋巴細(xì)胞加入

RPMI

25

μ

g/mLPHA，1640

培養(yǎng)基

（

含

1000U/mLIL－2，

10%

自體血漿或正常人

AB

型血清

），

置于飽和濕度

，

37℃、5%CO

2

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

。

根據(jù)細(xì)胞生長狀況

2～

3d

換液

1

次

，5～7d

后

，

培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)內(nèi)毒素

、

細(xì)菌培

養(yǎng)

、

真菌培養(yǎng)及支原體檢測陰性后收獲細(xì)胞

，

臺盼藍(lán)染

7細(xì)胞活率≥

85%。

取

（2～4）×10

淋巴細(xì)胞進(jìn)行皮

1．2

1．3

患者一般情況

試劑

患者現(xiàn)病史

、

既往史

、

月經(jīng)史

、

家

族史及配偶一般情況無異常

。

淋巴細(xì)胞分離液購自天津?yàn)蠊?/p>

，

植物

IL－2

購自北京四環(huán)血凝素

（PHA）

為美國

Sigma

產(chǎn)品

，

PRMI1640

培養(yǎng)基系美國

GBICO

公司制藥有限公司

，

產(chǎn)品

，

封閉抗體檢測試劑盒系美國

OneLambda

公司

產(chǎn)品

。

1．4

1．4．1

常規(guī)檢查

男方精液常規(guī)

；

遺傳性疾病檢查

（

染體核

4

次為

1

個內(nèi)注射

。

兩組每次治療間隔均為

1～2

周

，

治療過程中避孕

。

療程結(jié)束后

2

周復(fù)查封閉抗療程

，

體

，

無論封閉抗體陽性與否均計劃受孕

，

如獲妊娠則馬