肺炎支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法及進(jìn)展

發(fā)表時(shí)間：2016-08-07T11:16:55.137Z來(lái)源：《健康世界》2016年第12期作者：王好玉1管樂(lè)東2陶愛(ài)軍3

[導(dǎo)讀]肺炎支原體易感人主要是兒童和青少年（尤其是5-19歲）。

1山東省青州市人民醫(yī)院262500；2濰坊市寒亭區(qū)人民醫(yī)院261100；3壽光市中醫(yī)醫(yī)院262700

目前從分離到的支原體總數(shù)已達(dá)20多種，對(duì)人致病的主要有肺炎支原體、解脲脲原體、人型支原體和生殖道支原體。肺炎支原體

是非典型肺炎和社區(qū)獲得性肺炎的常見(jiàn)病原體之一，它通過(guò)口、鼻分泌物經(jīng)空氣傳播，可引起兒童氣管炎、支氣管炎、原發(fā)性非典型肺炎

和成年人社區(qū)獲得性肺炎等呼吸道疾病。支原體肺炎的發(fā)病率可占所有肺炎總發(fā)病率的20%-30%，在流行高峰時(shí)其發(fā)病率甚至可達(dá)到肺炎

總發(fā)病率的70%-80%。肺炎支原體易感人主要是兒童和青少年（尤其是5-19歲）。

臨床表現(xiàn)除呼吸道感染外，尚可引起多種肺外癥狀，可以與其它細(xì)菌、病毒感染混淆，并且對(duì)B一內(nèi)酞胺類無(wú)反應(yīng)，也有關(guān)于混合感

染的報(bào)道，在兒童尤其是5歲以下的兒童呼吸道感染中扮演著極為重要的角。肺炎支原體感染可以無(wú)特殊的臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及影像

學(xué)表現(xiàn)，目前也沒(méi)有快速有效的特異性診斷方法免疫應(yīng)答反應(yīng)主要基于微生物表面的膚和糖脂抗原，其中，Ig-M抗體多在一周左右開(kāi)始升

高，隨后是Ig-G抗體，再感染時(shí)Ig-G和Ig-M滴度升高，由于時(shí)間的延遲和二次血清的不易獲得，抗體檢測(cè)臨床意義略差。因此，及時(shí)快速

準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷顯得尤為重要，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在支原體研究領(lǐng)域的應(yīng)用，PCR技術(shù)己經(jīng)成為快速診斷支原體感染的方法，目前已

發(fā)展了聚合酶鏈反應(yīng)和基因探針等分子生物學(xué)檢測(cè)方法，并有較多文章對(duì)各種分子生物學(xué)方法及血清學(xué)方法進(jìn)行比較，其中熒光實(shí)時(shí)定量

PCR因費(fèi)時(shí)少并能全程監(jiān)控而較其它方法先進(jìn)，本文就近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)中介紹的某些檢測(cè)方法做一綜述。

1、病原學(xué)檢查培養(yǎng)法：

為檢測(cè)活的支原體的方法，支原體可在有氧和無(wú)氧條件下均能生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度慢，一般為7-10天，作為傳統(tǒng)的檢測(cè)手段，至今仍是支

原體鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，由于可靠性好，但因耗時(shí)長(zhǎng)，兒童難治性肺炎支原體肺炎的臨床研究時(shí)長(zhǎng)，作出判定需3-4周，對(duì)臨床指導(dǎo)治療意義不

大，且培養(yǎng)難度大，陽(yáng)性率不高，容易漏診，故臨床少用，而韓雪梅等[15]采用Mp快速液體培養(yǎng)法，利用MP生長(zhǎng)代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)液體中指

示劑顏發(fā)生改變來(lái)判斷MP生長(zhǎng)，該培養(yǎng)法于24h內(nèi)即可發(fā)出報(bào)告，陽(yáng)性率可達(dá)36.0%，說(shuō)明早期做MP液體培養(yǎng)對(duì)診斷肺炎支原體感染有

重要參考價(jià)值，但是如果標(biāo)本中含有大量能分解尿素的細(xì)菌如大腸埃希菌、假單胞菌、革蘭陽(yáng)性球菌時(shí)，可能對(duì)支原體培養(yǎng)基有影響，導(dǎo)

致假陽(yáng)性。超高倍顯微診斷：取咽拭子標(biāo)本處理后涂予玻片，置于萬(wàn)倍光顯微鏡下觀察上皮細(xì)胞內(nèi)活的支原體，費(fèi)時(shí)短，但對(duì)儀器要求

高，對(duì)操作者的臨床經(jīng)驗(yàn)和臨床知識(shí)要求高，且不能確定病原體的具體名稱。由于培養(yǎng)的困難，血清學(xué)可觀的陽(yáng)性率，以及可能存在的暫

時(shí)無(wú)癥狀的攜帶者的原因，使支原體感染的診斷變的很困難。

2、抗原檢測(cè)：呼吸道標(biāo)本MP直接抗原快速檢測(cè)方法包括：直接免疫熒光、對(duì)流免疫電泳、免疫印跡和抗原捕獲EIA由于這些方法敏

感性較低與呼吸道存在的其他支原體存在交叉反應(yīng)，使其應(yīng)用受到限制，由于抗原的檢測(cè)試驗(yàn)受到檢測(cè)敏感性的限制，當(dāng)存在較好的核酸

擴(kuò)增技術(shù)時(shí)，不推薦其用于診斷目的，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)也沒(méi)有檢測(cè)MP抗原的檢測(cè)試劑，最近，很多新的技術(shù)發(fā)展起來(lái)用于支原體的診斷，分子生

物學(xué)領(lǐng)域最為明顯，自1980年以來(lái)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室和臨床研究，確定了PCR方法檢測(cè)MP感染的可靠性，PCR法成為當(dāng)前檢測(cè)病原的常見(jiàn)方

法，?其中，一些與PCR相關(guān)的技術(shù)提供了更好的敏感性及更加的快速和簡(jiǎn)捷，在這些方法中有實(shí)時(shí)PCR，巢式PCR，RT一PCR和多重

PCR，但PCR的實(shí)驗(yàn)條件要求非常嚴(yán)格，且極微量的污染都會(huì)造成非特異性擴(kuò)增。

3、間接檢測(cè)：支原體感染后，一般在經(jīng)過(guò)7-10天后免疫力正常的會(huì)對(duì)其產(chǎn)生抗體，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)能間接證明存在支原體感

染，血清學(xué)檢測(cè)是診斷肺炎支原體感染的主要方法，常見(jiàn)的有免疫熒光試驗(yàn)，血清補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，顆粒凝集實(shí)驗(yàn)印和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

等，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)試驗(yàn)有省時(shí)，簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，單次滴度為64為陽(yáng)性，提示近期感染，是最早應(yīng)用MP實(shí)驗(yàn)室常規(guī)診斷的試驗(yàn)方法，現(xiàn)

已被改良的方法廣泛替代，在不同的試驗(yàn)中靶抗原不同，有的是蛋白，有的是糖脂類成分，尚未證實(shí)這些抗體檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否與生殖支

原體存在交叉反應(yīng)，一些商品化試劑盒用CF方法作為評(píng)價(jià)參考，但考慮到CF方法可檢測(cè)到與其他微生物或組織有交叉反應(yīng)的非特異糖脂抗

原，其檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量受到限制（出現(xiàn)假陽(yáng)性），不適于作為Mp感染診斷的參考標(biāo)準(zhǔn)，敏感性和特異性尚不理想，代謝抑制試驗(yàn)根據(jù)特異

性抗體能阻止支原體生長(zhǎng)及代謝這一特性，對(duì)MP采用發(fā)酵抑制試驗(yàn)進(jìn)行血清抗體測(cè)定，MP的代謝抑制試驗(yàn)需3-5d才能完成，一般在癥狀

出現(xiàn)后2周左右出現(xiàn)代謝抑制抗體，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，適用于作血清流行病學(xué)調(diào)查，敏感性與間接性血凝及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)相等或稍高，間接免疫

熒光試驗(yàn)熒光素能和抗體蛋白子結(jié)合而不使抗體活性喪失，仍能與相應(yīng)的抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，此復(fù)合物由于熒光素的參與，在熒光

顯微鏡下能觀察到其存在，從而能檢測(cè)相應(yīng)的抗原，間接血凝實(shí)驗(yàn)：由吸附于玻片上的抗原組成，特異抗體通過(guò)與抗人IgM或IgG熒光染料

結(jié)合染而被檢測(cè)，這些試劑盒提供了精確、定量的血清學(xué)資料，但試驗(yàn)結(jié)果的判斷受人的主觀影響，并需使用熒光顯微鏡。

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