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      訣竅減少DNA堿基編輯的錯誤
      
			
      
				2019-03-06 09:58:35
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      基因科學(xué)研究所(IBS，韓國)基因組工程中心的研究人員已經(jīng)確定了基于CRISPR的稱為腺嘌呤堿基編輯器的DNA編輯工具的錯誤率。評估這些創(chuàng)新技術(shù)的全基因組靶標(biāo)特異性對于利用其在臨床和生物技術(shù)中的應(yīng)用至關(guān)重要。該研究結(jié)果發(fā)表在Nature Biotechnology上。
      

      訣竅減少DNA堿基編輯的錯誤
      

      DNA的四個堿基是我們細(xì)胞使用的字母：腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)配對，胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)配對，形成32億個字母的獨(dú)特組合。由于一些遺傳性疾病是由一個字母的突變引起的，因此一種強(qiáng)大的基因工程工具CRISPR的一些應(yīng)用處理了這種單字母差異的糾正?？梢蕴砑拥紺RISPR系統(tǒng)以促進(jìn)字母轉(zhuǎn)換的蛋白質(zhì)的實(shí)例是用于C-to-T轉(zhuǎn)換的胞??嘧啶堿基編輯器(CBE)和用于A-to-G變化的腺嘌呤堿基編輯器(ABE)。迄今為止，IBS團(tuán)隊(duì)一直對研究ABE特異性感興趣。
      

      由Jin-Soo Kim領(lǐng)導(dǎo)的研究小組研究了人類細(xì)胞中最近開發(fā)的ABE蛋白ABE7.10 的錯誤率。他們確定了受ABE7.10影響的人類基因組位置，并掃描了超出目標(biāo)的錯誤。為此，他們使用了改良版Digenome-seq，這是一種由同一研究中心開發(fā)的測序技術(shù)，該技術(shù)已經(jīng)成功確定了CBE，CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1等的準(zhǔn)確性。
      

      他們用對應(yīng)于7個DNA靶標(biāo)的7個指導(dǎo)RNA測試ABE7.10，并將結(jié)果與??常見的CBE和Cas9核酸酶進(jìn)行比較。修改后的Digenome-seq在整個人類基因組中檢測到平均60個脫靶錯誤。有趣的是，盡管這三種蛋白質(zhì)被設(shè)計(jì)成針對同一個位點(diǎn)，但它們識別出不同的脫靶點(diǎn)。
      

      IBS生物學(xué)家還展示了一些策略來抑制脫靶修改的數(shù)量。在指南RNA末尾添加幾個Gs減少了脫靶錯誤，以及使用不同類型的Cas9(由2018年由同一團(tuán)隊(duì)開發(fā)的Sniper-Cas9)和ABE7.10的交付。通過預(yù)裝配的核糖核蛋白，而不是通過質(zhì)粒。
      

      該團(tuán)隊(duì)旨在為ABE的發(fā)展做出貢獻(xiàn)，以更精確和有效的方式引入所需的單字母變更。“隨著基礎(chǔ)編輯器的準(zhǔn)確性得到證實(shí)，我們預(yù)計(jì)它將在未來的醫(yī)療和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，”Jin-Soo Kim說。
      
			

			
        
      
			
      
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