標(biāo)記基因組原位
自2012年提出其機制以來,CRISPR / Cas9基因組編輯工具一直在科學(xué)界引起漣漪,許多科學(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了Cas9蛋白質(zhì)的剪刀樣特性的不同應(yīng)用。在今天發(fā)表在新植物學(xué)家的一項 研究中,來自萊布尼茨植物遺傳學(xué)和作物植物研究所的研究人員提出了一種利用RNA /蛋白質(zhì)復(fù)合物的新方法 - 在染色體水平上原位標(biāo)記和可視化DNA。
在過去的30年中,熒光原位雜交(FISH)已經(jīng)成為DNA分子可視化的既定方法。然而,F(xiàn)ISH需要DNA變性,這會破壞樣品的結(jié)構(gòu)。通過將他們的新方法基于CRISPR / Cas9,研究人員設(shè)法繞過這個變性步驟,同時仍然整合了傳統(tǒng)FISH方法所需的熒光標(biāo)記特性。
作為新的細胞遺傳學(xué)工具,稱為RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶原位標(biāo)記(RGEN-ISL),保留了樣本的結(jié)構(gòu),它開辟了研究基因組時空結(jié)構(gòu)的可能性。另外,它可以與蛋白質(zhì)檢測方法結(jié)合,以允許標(biāo)記過程的實時可視化,這可以揭示反應(yīng)的動力學(xué)。
此外,研究人員表明,RGEN-ISL優(yōu)于傳統(tǒng)方法組合,如FISH和免疫組化。RGEN-ISL需要較少的制備,相對更快和更便宜,并且可以在4°C至37°C的寬溫度范圍內(nèi)發(fā)揮作用。
RGEN-ISL
到目前為止,研究人員不僅測試了植物樣品中的RGEN-ISL,還測試了人類染色體中的RGEN-ISL,說明該方法可能適用于所有生物體。目前,該方法的使用局限于重復(fù)的DNA序列,其通常在植物基因組中發(fā)現(xiàn)。然而,根據(jù)第一作者石井隆義(Takayoshi Ishii)構(gòu)思了RGEN-ISL背后的初步想法,這種方法可能適用于將來甚至單拷貝序列的可視化。
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