抗生素抑菌試驗(yàn)報(bào)告
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實(shí)驗(yàn)報(bào)告:抗生素滅菌效果探究
高二(6)班王一峰
實(shí)驗(yàn)器材:培養(yǎng)皿,恒溫箱,錐形瓶,滴管,顯微鏡等
實(shí)驗(yàn)藥品:瓊脂,菌落培養(yǎng)液,多種抗生素。
實(shí)驗(yàn)基本原理:抗菌素抗菌的機(jī)理大致有如下幾種:
1.阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。以這種方式作用的抗生素主要是β-內(nèi)酰胺類抗生素(青霉素,
頭孢菌素類)。哺動(dòng)物的細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁,不受這類藥物的影響。
2.與細(xì)菌細(xì)胞膜相互作用,增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性、打開(kāi)膜上的離子通道,讓細(xì)菌內(nèi)部
的有用物質(zhì)漏出菌體或電解質(zhì)平衡失調(diào)而死。以這種方式作用的抗生素有多粘菌素和短桿
菌肽等。
3.與細(xì)菌核糖體或其反應(yīng)底物(如tRNA、mRNA)相互所用,抑制蛋白質(zhì)的合成——這
意味著細(xì)胞存活所必需的結(jié)構(gòu)蛋白和酶不能被合成。以這種方式作用的抗生素包括四環(huán)素
(四環(huán)素,金霉素,土霉素)類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(紅霉素,乙酰螺旋霉素)、氨
基糖苷類抗生素(鏈霉素,慶大霉素,卡那霉素)、氯霉素等。
4.阻礙細(xì)菌DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。阻礙DNA復(fù)制將導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞分裂繁殖受阻,阻礙DNA
轉(zhuǎn)錄成mRNA則導(dǎo)致后續(xù)的mRNA翻譯合成蛋白的過(guò)程受阻。以這種方式作用的主要是人
工合成的抗菌劑喹諾酮類(如氧氟沙星,諾氟沙星)。
5.影響葉酸代謝。抑制細(xì)菌葉酸代謝過(guò)程中的二氫葉酸合成酶和二氫葉酸還原酶,妨礙葉
酸代謝。因?yàn)槿~酸是合成核酸的前體物質(zhì),葉酸缺乏導(dǎo)致核酸合成受阻,從而抑制細(xì)菌生長(zhǎng)
繁殖,主要是磺胺類和甲氧芐啶。
通過(guò)觀察培養(yǎng)皿上涂抹抗生素后產(chǎn)生的抑菌圈大小,同時(shí)結(jié)合顯微鏡的觀察,比較不同抗
菌機(jī)理的抗生素的抑菌效果。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1.用蒸餾水洗凈培養(yǎng)皿。在培養(yǎng)皿底部的紗布上放一塊薄瓊脂片。用滴管均勻低價(jià)菌落培養(yǎng)
液(內(nèi)含大腸桿菌,化膿鏈球菌,金黃葡萄球菌,霉菌等等)。菌落大致形成直徑為20mm
的圓。
2.制做多個(gè)基本相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿。分別滴加2~3滴抗生素:
(1)阿莫西林(或盤尼西林)溶液
(2)諾氟沙星溶液
(3)紅霉素軟膏浸液
(4)鹽酸林可霉素注射液
抗生素覆蓋區(qū)均為直徑為5mm的圓。
3.其中,第一種方案作用機(jī)理是阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁合成,第二種方案是阻礙DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制,
第三和第四種方案都是通過(guò)與細(xì)菌核糖體或反應(yīng)底物結(jié)合抑制蛋白質(zhì)合成。
4.將四個(gè)培養(yǎng)皿放在恒溫箱中,等待結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象:四個(gè)培養(yǎng)皿均出現(xiàn)大小不一的抑菌圈,光學(xué)顯微鏡成像顯示,抑菌圈是以抗生素
為圓心的同心圓,抑菌圈范圍內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)明顯受到抑制或消失。抑菌圈外的菌落存在細(xì)菌生
長(zhǎng)。
通過(guò)尺可以量得,阿莫西林的抑菌效果最佳,抑菌圈直徑約為8mm。而諾氟沙星抑菌圈直
徑約為6mm,紅霉素和林可霉素抑菌圈直徑和諾氟沙星為代表的喹諾酮類抗生素大小基本
相同。但是顯微鏡成像顯示抑菌范圍內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目減少量不如阿莫西林多,也未發(fā)現(xiàn)胞體破
裂,抗生素大量分布的現(xiàn)象。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
結(jié)合抗生素的抑菌機(jī)理可知,β-內(nèi)酰胺類和頭孢菌素類抗生素抑菌效果最直接最顯著,但
是敏感測(cè)試顯示作用菌落范圍很小。而實(shí)驗(yàn)中的其他幾種抗生素由于需要進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部通
過(guò)抑制細(xì)胞的分裂與蛋白質(zhì)的合成,并不是直接殺死細(xì)菌母體,而是控制其分裂繁殖。因此
抑菌效果不顯著。但是這類的抗生素作用范圍廣,特別是配合自身免疫系統(tǒng),能夠產(chǎn)生
良好的抑菌效果。
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