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      四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜損傷的修復(fù)作用及機(jī)制

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      2022年4月21日發(fā)(作者:浮小麥)

      Chinese?。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉≈袊F醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期?。担贰?/p>

      四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜損傷的修復(fù)作用及機(jī)制 

      劉發(fā)強(qiáng) ,何玉英 ,李杰峰 ,張挪威 ,昝軍蘭。,劉鳳華。,許劍琴 

      (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室,北京海淀100193;2北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技系,北京昌平102206) 

      摘要:通過檢測(cè)脾虛大鼠空腸中PCNA和IGF-1的表達(dá),探討四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜修復(fù)的影響。試驗(yàn)分對(duì)照 

      組、脾虛組、四君子顆粒治療組和治療對(duì)照組,每組采取空腸中段作樣本;H.E.染法觀察空腸組織結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)法檢 

      測(cè)PCNA和IGF-1的表達(dá)。脾虛組大鼠空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度極顯著降低(P<O.01);四君子顆粒治療組大鼠絨毛長(zhǎng)度、隱 

      窩深度的顯著高于治療對(duì)照組(P<O.05)。脾虛組大鼠空腸中PCNA、IGF-1陽性細(xì)胞數(shù)極顯著增加(P%0.01);四君子顆粒 

      治療組PCNA、IGF-1陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)顯著高于治療對(duì)照組(P<O.05)。結(jié)果表明,四君子湯可以促進(jìn)脾虛模型大鼠空腸的修復(fù) 

      過程?!?/p>

      關(guān)鍵詞:胰島素樣生長(zhǎng)因子一1;PCNA;空腸;脾虛 

      中圖分類號(hào):¥853.91;¥865.1 2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0529—6005(2012)05—0057—03 

      Repair?。澹妫妫澹悖簦蟆。幔睿洹。恚澹悖瑁幔睿椋螅恚蟆。铮妗。樱椋辍。酰睿椤。洌澹悖铮悖簦椋铮睢。希椋臁。洌幔恚幔纾濉?/p>

      of?。簦瑁濉。剩澹辍。酰睿幔臁。恚酰悖铮螅帷。椋睢。螅穑欤澹澹?。deficiency rat 

      LIU?。疲幔瘢椋幔睿纭。龋拧。伲酰椋睿纭?,LI?。剩椋澹妫澹睿纭?,ZHANG Nuo-wei ,ZAI Jun-lan ,UU?。疲澹睿纾瑁酰幔?,XU Jian-qin 

      (1.China?。粒幔纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。眨睿椋觯澹颍螅椋簦?,Beijing?。保埃埃保梗?,China; 

      2.Department of?。粒睿椋恚幔臁。樱悖椋澹睿悖濉。幔睿洹。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾拢澹椋辏椋睿纭。茫铮欤欤澹纾濉。铮妗。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍澹拢澹椋辏睿?,102206,China) 

      AbstraCt:The?。穑酰颍穑铮螅濉。铮妗。簦瑁椋蟆。螅簦酰洌。鳎幔蟆。簦铩。椋睿觯澹螅簦椋纾幔簦濉。簦瑁濉。澹妫妫澹悖簟。铮妗。樱椋辏酰睿椤。洌澹悖铮悖簦椋铮睢。铮睢。颍澹穑幔椋颉。铮妗。簦瑁濉?/p>

      jejunum?。恚酰悖铮螅帷。铮妗。螅穑欤澹澹睿洌澹妫椋悖椋澹睿悖。颍幔簟。猓。洌澹簦澹悖簦椋睿纭。簦瑁濉。澹穑颍澹螅螅椋铮睢。铮妗。校茫危痢。幔睿洹。桑牵埔唬保裕瑁椋蟆。螅簦酰洌。椋睿?/p>

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      ment control group.Part?。铮妗。椋澹辏酰睿酰怼。铮妗。澹幔悖琛。颍幔簟。鳎幔蟆。澹悖椋螅澹洹。幔蟆。螅幔恚穑欤澹?;the?。恚澹簦瑁铮洌蟆。铮妗。铮猓螅澹颍觯幔簦椋铮睢。铮睢。簦瑁濉?/p>

      structure?。铮妗。辏澹辏酰睿酰怼。幔睿洹。洌澹簦澹悖簦椋铮睢。铮妗。校茫危痢。幔睿洹。桑牵埔唬薄。鳎澹颍濉。龋拧。螅簦幔椋睿椋睿纭。幔睿洹。椋恚恚酰睿铮瑁椋螅簦铮悖瑁澹恚椋螅簦颍?,re— 

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      0.05);villus length?。幔睿洹。悖颍穑簟。洌澹穑簦琛。铮妗。颍幔簦蟆。椋睢。樱椋辍。酰睿椤。洌澹悖铮悖簦椋铮睢。簦颍澹幔簦恚澹睿簟。纾颍铮酰稹。鳎幔蟆。螅椋纾睿椋妫椋悖幔睿簦欤。瑁椋纾瑁澹颉?/p>

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      junzi decoction?。悖铮酰欤洹。幔悖悖澹欤澹颍幔簦濉。颍澹穑幔椋颉。铮妗。簦瑁濉。辏澹辏酰睿酰怼。恚酰悖铮螅帷。铮妗。螅穑欤澹澹睿洌澹妫椋悖椋澹睿悖。颍幔簦螅?/p>

      Key words:insulin—like?。纾颍铮鳎簦琛。妫幔悖簦铮蛞唬?;PCNA;jejunum;spleen-deficiency 

      Corresponding author:XU?。剩椋幔睢瘢椋睿海蹋桑铡。疲澹睿纭瑁酰帷?/p>

      中(獸)醫(yī)脾虛證多表現(xiàn)消化系統(tǒng)功能障礙,證 動(dòng)一系列反應(yīng)保證黏膜結(jié)構(gòu)的完整性,其中一個(gè)重 

      見完谷不化,食后作瀉,大便稀溏,消瘦等。近年來 要的反應(yīng)是腸組織再生,這是由腸干細(xì)胞參與的非 

      研究表明,脾虛證患者和大鼠模型的胃腸道組織會(huì) 常復(fù)雜的過程。細(xì)胞增殖標(biāo)記物一增殖細(xì)胞核抗原 

      出現(xiàn)病理變化,如胃黏膜變薄,小腸絨毛損傷、萎縮, 

      (Proliferating?。茫澹欤臁。危酰悖欤澹幔颉。粒睿簦椋纾澹睿?jiǎn)稱PCNA) 

      細(xì)胞器非正常變化等Ⅲ。當(dāng)腸黏膜損傷時(shí),機(jī)體啟 

      是DNA聚合酶的重要輔助因子,常作為評(píng)價(jià)細(xì)胞 

      增殖狀態(tài)的重要指標(biāo)[2]。腸道隱窩干細(xì)胞的分裂狀 

      收稿日期:2011-08-26 

      基金項(xiàng)目:高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20100008110— 

      態(tài)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。PCNA生長(zhǎng)因子可以調(diào)節(jié)多種 

      024);國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30771591) 

      細(xì)胞的增殖、移行和分化,在維持腸黏膜穩(wěn)態(tài)及其結(jié) 

      作者簡(jiǎn)介:劉發(fā)強(qiáng)(1986一),男,碩士生,研究方向?yàn)橹形鳙F醫(yī)結(jié) 構(gòu)完整性方面發(fā)揮著重要作用_3]。有研究表明,胰 

      合,E-mail:liufaqiangl11@163.eom;何玉英(1964一),女,實(shí)驗(yàn)師,碩 島素樣生長(zhǎng)因子一1(insulin-like?。纾颍铮鳎簦琛。妫幔悖簦铮蛞唬?, 

      士,主要從事小動(dòng)物的臨床檢驗(yàn),E-mail:hyyy@sina.corn 

      注:何玉英和劉發(fā)強(qiáng)對(duì)本文有同等貢獻(xiàn) 

      IGF一1)可以加速腸黏膜損傷后的修復(fù)過程_4]?!?/p>

      通訊作者:許劍琴,E-mail:jianqinxucau@126.eom;劉風(fēng)華, 

      四君子顆粒由黨參、白術(shù)、茯苓和甘草四味中藥 

      E-mail:liufenghua12O9@126.eom 組成,是治療脾虛證的經(jīng)典方劑。目前已有研究表 

      58 中國獸醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期?。茫瑁椋睿澹螅濉。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉?/p>

      明,四君子湯對(duì)大鼠和小鼠小腸免疫功能、胃腸運(yùn)動(dòng) 

      水合。二甲苯5?。恚椋钕矗泊?,二甲苯:無水乙醇 

      (1:1)5?。恚椋钕矗贝危瑹o水乙醇5?。恚椋钕矗泊危梗怠?、 等生理活動(dòng)有重要調(diào)節(jié)作用-5 ],但在脾虛動(dòng)物腸黏 

      膜損傷修復(fù)過程中作用研究甚少??漳c是食物消 

      化、吸收的主要部位,為此,本試驗(yàn)檢測(cè)空腸中PC— 

      NA和IGF一1的表達(dá),探討經(jīng)典方劑四君子湯對(duì)脾 

      虛大鼠空腸修復(fù)過程的影響,為中獸醫(yī)脾虛證之實(shí) 

      9O 、8O 、7O 、50 的乙醇各5?。恚椋钕矗贝危?/p>

      ddH?。病。稀。怠。恚椋钕矗贝?,PBS 5?。恚椋钕矗炒?。(2)抗原 

      修復(fù)。用檸檬酸鈉緩沖液(pH值6.O)于微波爐中 

      質(zhì)、四君子湯的藥理作用機(jī)制和臨床應(yīng)用提供理論 

      煮沸(高火5 min,中低火3?。恚椋睢。炒危?。修復(fù)后,組 

      織切片自然涼至室溫。(3)封閉內(nèi)源性過氧化物酶 

      基礎(chǔ)。 

      1材料與方法 

      1.1藥物及主要試劑、設(shè)備成年SD雄性大鼠24 

      只,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。利 

      血平注射液(1?。恚纾恚蹋?,購自廣東邦民制藥有限公 

      司。四君子顆粒(黨參、白術(shù)、茯苓和炙甘草),購自 

      湖北武當(dāng)生物制藥有限公司。石蠟(Sigma公司,美 

      國);蘇木精、伊紅(Sigma公司,美國);乙醇、二甲苯 

      (dk京化工廠);兔抗大鼠PCNA多抗(北京博奧森 

      生物技術(shù)有限公司);兔抗大鼠IGF一1單抗(Santa 

      Cruz,美國);兔抗體免疫組化試劑盒(南京凱基生物 

      技術(shù)發(fā)展有限公司);BH 型生物顯微鏡(Olympus, 

      日本)?!?/p>

      1.2動(dòng)物分組、處理和樣本采集 試驗(yàn)大鼠24只 

      適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,隨機(jī)分為對(duì)照組、脾虛組、四君 

      子顆粒治療組和治療對(duì)照組,每組6只。試驗(yàn)第1 

      ~7天,脾虛組、四君子顆粒治療組和治療對(duì)照組大 

      鼠以0.5?。恚蹋耄珞w重[7 劑量腹腔注射利血平,對(duì)照 

      組以相同劑量和方法注射生理鹽水。試驗(yàn)第8天, 

      處死脾虛組和對(duì)照組所有大鼠,每只大鼠取空腸中 

      段5 cm,置于4 中性甲醛溶液固定,用于制作石蠟 

      切片。四君子顆粒治療組于試驗(yàn)第8天開始每天灌 

      服濃度為0.5?。纾恚痰乃木宇w粒,8?。恚蹋耄?d(劑 

      量根據(jù)人和大鼠體重?fù)Q算,系數(shù)為0.018[1。?。凰木印?/p>

      顆粒用蒸餾水溶解),治療對(duì)照組灌服相同劑量生理 

      鹽水,連續(xù)5?。?,于試驗(yàn)第13天處死兩組大鼠,采樣 

      及樣本處理和保存方法同脾虛組?!?/p>

      1.3 空腸組織H_E.染 石蠟切片經(jīng)二甲苯?!?/p>

      規(guī)脫蠟,二甲苯:無水酒精(1:1)、無水酒精95 

      ~5O 下行梯度酒精中各5?。恚椋睿K木精染約1O 

      min,蒸餾水沖洗、0.5 鹽酸分后,自來水沖洗藍(lán) 

      化30 min,經(jīng)蒸餾水沖洗、酒精脫水上行至95 后, 

      放入0.5 伊紅酒精染液染30?。?,再依次入95?。梗丁?/p>

      酒精、無水酒精、二甲苯,最后用中性樹膠封片?!?/p>

      光鏡下觀察比較各組大鼠腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變 

      化,采用Image—Pro?。校欤酰蟆。担眻D像分析系統(tǒng),測(cè)量 

      空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度,每個(gè)腸道組織切片選?。怠?/p>

      視野進(jìn)行統(tǒng)計(jì),取其平均值?!?/p>

      1.4 PCNA和IGF-1免疫組織化學(xué)法染 常規(guī) 

      方法制作石蠟切片,切片厚度4?。怼#ǎ保┏R?guī)脫蠟 

      3?。龋病。希彩覝胤跤玻啊。恚椋?。PBS中5?。恚椋钕矗炒巍!?/p>

      (4)1%山羊血清37℃封閉20?。恚椋?。(5)一抗孵育?!?/p>

      組織切片于200倍稀釋的抗體溶液中4℃孵育過 

      夜。PBS中5?。恚椋钕矗炒巍#ǎ叮┰诳雇蒙锼鼗?/p>

      抗中,37℃孵育30?。恚椋?。PBS洗3次,每次5?。恚椋??!?/p>

      (7)在鏈親和素標(biāo)記HRP溶液中,37℃孵育30 

      min。PBS洗3次,每次5?。恚椋?。(8)DAB顯2~5 

      min,顯微鏡下掌控。ddH?。跋矗炒?,每次5?。恚椋?。 

      (9)蘇木精復(fù)染10?。恚椋睿薄←}酸酒精分化,脫水、透 

      明后,中性樹膠封片?!?/p>

      每組中隨機(jī)選取3只大鼠的切片,每個(gè)切片高 

      倍鏡下隨機(jī)選?。祩€(gè)視野,觀察染情況。PCNA 

      染結(jié)果以空腸每個(gè)隱窩PCNA陽性細(xì)胞數(shù)表示; 

      IGF一1染結(jié)果以平均每個(gè)視野的IGF一1陽性細(xì)胞 

      數(shù)表示。 

      1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS?。樱簦幔簦椋螅簦椋悖蟆。保罚敖y(tǒng)計(jì)軟 

      件,顯著性分析采用t檢驗(yàn),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差 

      表示。 

      2 結(jié)果 

      2.1 臨床觀察脾虛組、四君子顆粒治療組和治療 

      對(duì)照組大鼠在試驗(yàn)第3天出現(xiàn)精神倦怠、蜷縮,飲 

      食、飲水量下降;試驗(yàn)第5天出現(xiàn)體重降低、門污 

      穢、大便稀溏、被毛凌亂等癥狀。停止注射利血平至 

      第13天取樣前,四君子顆粒治療組大鼠的精神狀 

      態(tài)、體重、飲食、飲水恢復(fù)程度明顯好于治療對(duì)照組?!?/p>

      2.2大鼠空腸形態(tài)學(xué)觀察?。龋牛竞笥^察,脾 

      虛組大鼠空腸絨毛頂端表皮脫落,絨毛、隱窩萎縮?!?/p>

      四君子顆粒治療組的絨毛高度、隱窩深度顯著高于 

      治療對(duì)照組(P<0.05);兩組空腸絨毛頂端損傷現(xiàn) 

      象基本消失。見圖1、2?!?/p>

      2.3?。校茫危恋拿庖呓M化檢測(cè) 中插彩版圖3和表 

      1結(jié)果顯示,PCNA在4組大鼠空腸中都有表達(dá)?!?/p>

      每個(gè)隱窩PCNA陽性細(xì)胞數(shù)脾虛組極顯著少于對(duì) 

      照組(PG0.01);四君子顆粒治療組顯著多于治療 

      對(duì)照組(PG0.05)?!?/p>

      2.4?。桑牵埔唬钡拿庖呓M化檢測(cè)表1結(jié)果顯示,大鼠 

      空腸中IGF一1陽性細(xì)胞數(shù)脾虛組極顯著少于對(duì)照組 

      (PG0.01);四君子顆粒治療組極顯著多于治療對(duì) 

      照組(PG0.01)?!?/p>

      60 中國獸醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期 Chinese?。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉?/p>

      中藥復(fù)方對(duì)慢性熱應(yīng)激蛋雞肺臟鈣含量 

      及熱休克蛋白70表達(dá)量的影響 

      段凱文,宋曉琳,郭 浩,高志民,石達(dá)友,郭世寧 

      (華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510642) 

      摘要:選用體質(zhì)健康,體重、產(chǎn)蛋率基本一致的6o周齡海藍(lán)白蛋雞250只,隨機(jī)分為5組:中藥復(fù)方I、Ⅱ、Ⅲ組、電解多維 

      組、高溫對(duì)照組。本試驗(yàn)檢測(cè)蛋雞肺臟中鈣含量,并采用ELISA法測(cè)定蛋雞肺臟組織熱休克蛋白70(HSPT0)表達(dá)量。結(jié)果 

      顯示,復(fù)方中藥能夠提高肺臟鈣離子(Ca?。舛群停龋樱校罚氨磉_(dá)量。復(fù)方I組能明顯提高Ca 濃度。各藥物組的肺臟HSP70 

      含量均高于高溫對(duì)照組,其中復(fù)方Ⅲ組最為明顯,但是復(fù)方I組對(duì)HSP70的增加效果最顯著。結(jié)果表明,HSP70與鈣含量變 

      化呈一定的正相關(guān),中藥有可能通過提高鈣離子濃度而實(shí)現(xiàn)對(duì)HSP7O的調(diào)控。 

      關(guān)鍵詞:中藥復(fù)方;熱應(yīng)激;鈣;熱休克蛋白70 

      中圖分類號(hào):¥853.74 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 

      , 

      文章編號(hào):0529—6005(2012)05—0060—03 

      Effects?。铮妗。悖铮恚穑铮酰睿洹。茫瑁椋睿澹螅濉。瑁澹颍猓幔臁。恚澹洌椋悖椋睿濉。铮睢。簦瑁濉。悖希睿悖澹睿簦颍幔簦椋埃睢。铮妗。茫幔玻幔睿洹?/p>

      regulation?。铮妗。龋樱校罚啊。椋睢。欤酰睿纾蟆。簦椋螅螅酰澹蟆。铮妗。瑁澹睿蟆。酰睿洌澹颉。悖瑁颍铮睿椋恪。瑁澹幔簟。螅簦颍澹螅蟆?/p>

      DUAN Kai—wen,SONG?。兀椋幔铩欤椋?,GUO Hao,GAO Zhi—min,SHI?。模帷铮?,GUo?。樱瑁椤睿椋睿纭?/p>

      (College?。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿澹樱铮酰簦琛。茫瑁椋睿帷。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。眨睿椋觯澹颍螅椋簦牵酰幔睿纾瑁铮酢。担保埃叮矗玻茫瑁椋睿幔?/p>

      Abstract:Two?。瑁酰睿洌颍澹洹。叮耙唬洌幔幔纾濉。瑁澹幔欤簦琛。欤幔椋睿纭。瑁澹睿蟆。鳎椋簦琛。螅椋恚椋欤椋幔颉。鳎澹椋纾瑁簟。幔睿洹。欤幔椋睿纭。颍幔簦濉。鳎澹颍濉。颍幔睢?/p>

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      Corresponding author:GU0?。樱瑁椤睿椋睿纭?/p>

      高溫季節(jié),蛋雞易發(fā)生熱應(yīng)激,在中醫(yī)理論中, 

      熱應(yīng)激被稱為暑熱證或中暑,是暑邪和濕熱乘機(jī)體 

      上應(yīng)先清熱利濕,濕邪得化,則蘊(yùn)熱之因除,兩邪得 

      以分解,病即可轉(zhuǎn)機(jī) 。近年來中藥的研發(fā)與使用 

      越來越受到人們的重視,應(yīng)用中藥防治畜禽熱應(yīng)激 

      作者簡(jiǎn)介:段凱文(1987一),女,碩士生,從事中草藥抗熱應(yīng)激方 

      面研究,E—mail:491122198@qq.corn 

      通訊作者:郭世寧,E—mail:shining@scau.edu.cn 

      正氣不足之機(jī)侵犯機(jī)體所致,屬濕熱證 。在治療 

      收稿日期:2011-07—26 

      基金項(xiàng)目:“十一五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2008BAQB4B01— 

      6);廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2008B09050025G);廣東省中國科 

      學(xué)院全面戰(zhàn)略合作資助項(xiàng)目(2010B090301040) 

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