南通體臣衛(wèi)校

畢業(yè)論文

題目三種肺炎支原體檢測法

的臨床應(yīng)用分析

地市:南通市

學校:體臣衛(wèi)校

準考證號:

考生姓名:陸施燕

指導(dǎo)老師:

2015年5月24日

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三種肺炎支原體檢測法的臨床應(yīng)用分析

摘要

目的探討肺炎支原體（MP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)

（PCR）法和血清MP被動凝集法（MP-Ab）等方法在兒童MP感染診斷治療過程

中的敏感性方法采用3MP檢測法對362例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的

患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCR，同

時取血清做MP-Ab檢測，對3種方法的檢測結(jié)果與臨床診斷治療病例進行回顧

性分析。結(jié)果回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養(yǎng)法檢出陽性

78例，陽性率為51.3%，病程為（4.5±2.6）天；PCR法檢測出陽性103例，陽

性率為67.8%，病程為（6.2±3.5）天；MP-Ab法檢測出陽性127例，陽性率83.5%，

病程（8.1±4.5）天。結(jié)論3種MP檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床醫(yī)生

應(yīng)根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。

關(guān)鍵詞肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)，血清抗體，配對

研究

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目錄

前言...................................................................................5

第一章文獻綜述..............................................................6

§1.1肺炎支原體的定義................................................................6

§1.2肺炎支原體的發(fā)病機制........................................................6

§1.3肺炎支原體的分類................................................................6

§1.4肺炎支原體的臨床表現(xiàn)........................................................6

§1.5肺炎支原體的臨床診斷........................................................7

§1.6肺炎支原體的實驗室檢查...................................................7

第二章材料和方法............................................................8

§2.1樣本.........................................................................................8

§2.2方法概述.................................................................................8

§2.3臨床診斷MP感染的診斷標準.............................................8

§2.4實驗方法.................................................................................9

§2.5統(tǒng)計學方法............................................................................9

第三章結(jié)果......................................................................10

第四章討論......................................................................11

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結(jié)論..................................................................................12

參考文獻............................................................................12

致謝..................................................................................13

附錄....................................................................................14

錯誤！未定義書簽。

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前言

肺炎支原體（mycoplasmapneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的

主要病原體之，臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約3%～10%可發(fā)展為支原

體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼

吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床

擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，通過病

例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準確做出診治。

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第一章文獻綜述

1.1肺炎支原體的定義

小兒肺炎支原體肺炎多見于5~15歲兒童，嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細支氣管

炎。多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干

咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。X線改變明顯，多為單側(cè)病變，也可見雙側(cè)病變，

以下葉為多見，有時病灶呈游走性，少數(shù)呈大葉性陰影；病程2~3周不等，X線

陰影完全消失比癥狀消退更延長2~3周之久，偶有延長至6周者。

1.2肺炎支原體的發(fā)病機制

肺炎支原體肺炎（MycoplasmaPneumoniaePneumonia，MPP）的發(fā)病機制仍

不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫學發(fā)病機制

等學說，其中免疫調(diào)節(jié)異常在MPP的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用

1.3肺炎支原體的臨床表現(xiàn)

1.多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干

咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。

2.可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害，皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見

非特異性肌痛和游走性關(guān)節(jié)痛；也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)損害、血尿及溶

血性貧血等。

3.全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低及少許干

濕羅音者

1.4肺炎支原體的臨床診斷

病原學診斷

肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于被動凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期可

提供重要的依據(jù)，可做為臨床診斷MP感染的優(yōu)先試驗[8]；氣管肺泡灌洗液

MP-DNA測定不僅能診斷MP感染,且支氣管肺泡灌洗術(shù)可促進呼吸道癥狀的改善

及體征恢復(fù)，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液MP-DNA，痰液MP-DNA

及血清MP抗體檢測陽性率沒有差異。CRP的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法，

一定程度可區(qū)分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測MP具有

可靠、特異性高的特點，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。

1.5肺炎支原體的實驗室檢查

急性期MPP患兒血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明顯升高，IgA明顯降低；而

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恢復(fù)期hs-CR、IgG仍然較高，而IgM和IgA均沒有明顯變化，補體C3、C4在恢

復(fù)期內(nèi)也沒有明顯變化，因此血清C-反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監(jiān)測

對診斷急性期或恢復(fù)期MPP有重要意義。MP-IgM和冷凝集試驗同時檢測可提高

小兒支原體肺炎實驗診斷的準確率；支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占

80%，中性粒細胞增高占61%；65.6%患兒C-反應(yīng)蛋白增高；53.6%患兒血沉增快；

58.4%患兒心肌酶譜增高；24.0%患兒肝酶增高；16.8%患兒尿酸增高。5流行病

學特點及進展

MP肺炎發(fā)生率約為22.3%，9～12歲感染率最低,3～6歲最高,10～12月是

發(fā)病高峰月,小兒支原休肺炎發(fā)病率有所上升,發(fā)病年齡有趨小傾向,秋冬季發(fā)病

率高,肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播，尤其發(fā)病率較高的地區(qū)，局部區(qū)域

每隔3-5年可發(fā)生一次肺炎支原體感染，每2-6年可發(fā)生一次大范圍的肺炎支原

體感染，每次感染的時間都持續(xù)較長，有的感染可持續(xù)一年左右，因此，有關(guān)部

門一定要采取相應(yīng)的預(yù)防措施，切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發(fā)生和流行

具有重大意義?？刂浦гw感染的發(fā)生和流行。

第二章材料和方法

2.1樣本

收集黃河中心醫(yī)院檢驗科2013年1月1日～8月6兒科就診住院患兒

病例，有呼吸道感染癥狀，已經(jīng)初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象，

其中男175例，女187例；年齡為2個月～12歲，病程為1～90天。

2.2方法

具體方法有：（1）用MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對

362例研究對象同時進行檢測，記錄結(jié)果。（2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP

感染的例數(shù)，并按年齡、病程和3種MP檢測法結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。

2.3臨床診斷MP感染的診斷標準

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按文獻［1］、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷——即患兒經(jīng)紅霉素治

療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實驗室檢查3種檢測法至少有

一種陽性。病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開

始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。

2.4MP快速培養(yǎng)法

支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術(shù)有限公司提供。清

晨患兒未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說明書進行，將咽拭子

用無菌生理鹽水處理，接種到預(yù)溫的培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)；培養(yǎng)基

液體顏由紫紅變?yōu)椴菥G或嫩綠且清亮，并且在靜置時，瓶底

有藍顆?；蛭镔|(zhì)沉淀為陽性，5天后培養(yǎng)基顏不變或無藍顆粒

或物質(zhì)沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學達安基因股份有限公司

提供。應(yīng)用PCR法檢測MP-DNA，嚴格按試劑盒說明書進行，以在紫

外燈下出現(xiàn)180bp擴增帶結(jié)果判為陽性。每次試驗均設(shè)陽性、陰性

對照（陽性對照為MP質(zhì)粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進行

操作，質(zhì)量控制。MP-Ab法：試劑為日本瑞必歐株式會社MP-Ab檢測

試劑SERODIA-MYCOⅡ凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說明書操作，

抽取患兒靜脈血3ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結(jié)

果以≥1∶40判斷為陽性。每次試驗均設(shè)未致敏明膠顆粒、致敏明膠

顆粒和陽性、陰性血清進行測定。

2.5統(tǒng)計學方法

計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，各年齡組與3種檢測方法結(jié)果比較用

Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用χ2檢驗；3種檢測方法陽

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性結(jié)果與病程之間的比較用q檢驗。

第三章結(jié)果

3.1陽性樣本

經(jīng)過回顧性診斷，在配對研究組362例研究對象中有152例符合MP感染的

診斷標準，即有152例確診病例，其中肺炎45例，支氣管炎56例，上呼吸感染

49例，支氣管哮喘2例。MP快速培養(yǎng)法檢測出78例陽性，PCR法檢測出103例

陽性，MP-Ab法檢測出127例陽性。

3.2結(jié)果分析

各確診病例的年齡分布，見表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以3～4歲

年齡段的病例最多，為46例，陽性率最高，為70.77%，與其余年齡組段比較

P<0.05。3種檢測法的陽性檢測結(jié)果與年齡分布見表1，表1顯示3種檢測法與

年齡之間差異無統(tǒng)計學意義，以3～4歲的年齡段與其余年齡組段比較差異無統(tǒng)

計學意義，P>0.05。不同病程患兒3種檢測法的檢測結(jié)果，見表2，表2顯示MP

快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為（4.5±2.6）天，PCR法為陽性的患兒

病程均值為（6.2±3.5）天，MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為（8.1±4.5）

天。3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。表1不同年齡組MP感染

確診病例和3種檢測方法結(jié)果對比分析注：△□代表與年齡組3～4歲組段比較

結(jié)果表2不同病程患兒3種檢測方法陽性結(jié)果對比分析注：△代表三組之間的

兩兩比較

第四章討論

MP感染的臨床表現(xiàn)常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相

混淆。在臨床上患兒有下列癥狀：（1）發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非

膿性痰，偶帶血絲。（2）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（3）肺

部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。（4）WBC正常或升高。（5）

青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有效。（6）

實驗室MP檢驗有1項或1項以上陽性具備以上2個條件或以上者可初步診斷為

MP感染。多時候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)患兒的癥狀、體

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征和病史做MP感染的診斷性治療，但應(yīng)與肺結(jié)核相互鑒別。

2近年來由于診斷技術(shù)的提高，MP感染報道日漸增多，一般認為MP感染以年長

兒發(fā)病較多，本文表1資料顯示，2～8歲年齡段是發(fā)病的高峰期［2］。占同期

呼吸免疫科住院患兒的9.3%，比有關(guān)文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病

的10%～20%低。說明MP感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不典

型。

3臨床實驗室檢測MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷MP感染缺乏特

異性，敏感性也差，易受病程的影響［3］。本文采用配對資料研究，對疑為MP

感染的患兒進行3種MP檢測法，以探討MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等方

法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病

程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。

4MP快速培養(yǎng)法是利用MP生長代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中指示劑顏發(fā)生改變來

判斷MP生長；標本中的其他支原體和細菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀

均被抑制。該法陽性結(jié)果可48h檢出。結(jié)果顯示，培養(yǎng)法陽性率為51.3%

（78/152），低于另外兩種方法的陽性率?？赡芘c在檢測前患兒已經(jīng)用了MP敏感

藥物有關(guān)。表2結(jié)果顯示，該法陽性病例病程最短。提示病程時間較短的患兒選

擇此方法對檢測的陽性率較高。MP培養(yǎng)是診斷MP的金標準［4］。

5咽拭子PCR法檢測質(zhì)粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術(shù)可從患兒

痰中檢測MP-DNA。由于此方法相當敏感，易受污染，故實驗室操作時應(yīng)特別小

心。統(tǒng)計結(jié)果顯示，該法的陽性率為67.76%（103/152），高于快培法。此法彌

補了極微量的和被藥物殺死的MP不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表2結(jié)果顯

示，該法陽性病例，病程為（6.2±3.5）天。詳細資料顯示，有病程在30天以

上的患兒經(jīng)抗MP治療，該法仍可為陽性，說明MP的生存力相當強，要系統(tǒng)化治

療。

血清MP-Ab法陽性率是3種檢測方法中最高的，為83.55%（127/152），該法

是檢測患兒血清中的MP抗體，而非直截了當檢測MP本身，因而陽性結(jié)果并不能

確診是MP感染。對患兒狀態(tài)的綜合評估應(yīng)包括對患者臨床癥狀和試驗結(jié)果的嚴

謹分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些MP感染的患者不

產(chǎn)生抗體或只產(chǎn)生少量的抗體，高抗體滴度的樣品要出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。表2結(jié)果顯

示，該法陽性病例，病程最長，這是由于發(fā)病初期，機體中尚未產(chǎn)生抗體而不能

被檢測出，提示發(fā)病時間較長或經(jīng)過多種藥物治療過的患兒選擇此方法有較高的

陽性率。此檢測法結(jié)果往往受抗體出現(xiàn)的時相及患兒年齡、機體免疫系統(tǒng)狀況等

多方面的影響。

結(jié)論

臨床應(yīng)根據(jù)患兒的不同病程、不同年齡以及用藥情況來選取實驗室的檢測方

法，以提高MP的陽性檢測率，以更好地結(jié)合臨床癥狀進行綜合分析，從而提高

小兒MP感染診斷的準確率。

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參考文獻

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學，1996，17（4）：218.

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現(xiàn)代醫(yī)院，2006，6（6）：86-87.