第３２卷第６期　

２０１３年１２月　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—９６９０．２０１３．０６．０１２　

中國野生植物資源　

Ｃｈｉｎｅｓｅ?。住。校欤幔睿簟。遥澹螅铮酰颍悖澹蟆?/p>

Ｖ０１．３２　Ｎｏ．６　

Ｄｅｃ．２０１３　

不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷含量的分析　

姚正穎，張衛(wèi)明，孫力軍　

（南京野生植物綜合利用研究院，江蘇南京２１００４２）　

摘要　目的：比較分析不同季節(jié)的灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷的含量，為綜合利用莖葉資源提供參考　

依據(jù)。方法：采用蒸制曬干法對灰氈毛忍冬的莖葉進行干燥處理，利用超聲波法提取樣品中的綠原酸和木犀草苷　

并通過高效液相譜法進行含量測定。結(jié)果：綠原酸和木犀草苷含量在不同季節(jié)的灰氈毛忍冬莖葉中差異明顯?！?/p>

綠原酸含量依次為花＞葉＞莖，以秋季（１１月份）葉片樣品中的綠原酸含量最高（３．０３１％），是花蕾中含量的９６％；　

木犀草苷含量總體趨勢為葉＞花和莖，以冬季（２月份）葉片樣品中的含量最高（０．５５８％），是花蕾中含量的４．６　

倍；二者均高于２０１０版《中國藥典》對山銀花和金銀花指標物質(zhì)含量的規(guī)定。結(jié)論：秋冬季節(jié)對灰氈毛忍冬進行休　

眠期整型修剪，副產(chǎn)物葉片資源豐富，藥源成分充足，具有廣闊的開發(fā)應用前景?！?/p>

關鍵詞灰氈毛忍冬；莖葉；綠原酸；木犀草苷；高效液相譜　

文獻標識碼：Ａ　文章編號：１００６—９６９０（２０１３）０６—００３５—０４　中圖分類號：Ｒ２８４．１　

Ｃｏｎｔｅｎｔ?。粒睿幔欤螅椋蟆。铮妗。茫瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪。粒悖椋洹。幔睿洹。牵幔欤酰簦澹铮欤椋睢。妫颍铮怼。樱簦澹恚蟆。幔睿洹?/p>

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Ｙａｏ?。冢瑁澹睿纾椋睿纾冢瑁幔睿纭。祝澹椋恚椋睿?，Ｓｕｎ　Ｌｉｊｕｎ　

（Ｎａｎｊｉｎｇ?。桑睿螅簦椋簦酰簦濉。妫铮颉。茫铮恚穑颍澹瑁澹睿螅椋觯濉。眨簦椋欤椋幔簦椋铮睢。铮妗。祝椋欤洹。校欤幔睿簦?，Ｎａｎｊｉｎｇ?。玻保埃埃矗?，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ?。希猓辏澹悖簦椋觯澹海裕铩。悖铮恚穑幔颍濉。簦瑁濉。悖铮睿簦澹睿簟。铮妗。悖瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪。幔悖椋洹。幔睿洹。纾幔欤酰簦澹铮欤椋睢。妫颍铮怼。螅簦澹恚蟆。幔睿洹。欤澹幔觯澹蟆?/p>

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ｌｉｎ?。鳎澹颍濉。澹簦颍幔悖簦澹洹。猓。酰欤簦颍幔螅铮睿椋恪。恚澹簦瑁铮洹。幔睿洹。洌澹簦澹颍恚椋睿澹洹。猓。瑁椋纾琛。穑澹颍妫铮颍恚幔睿悖濉。欤椋瘢酰椋洹。悖瑁颍铮恚幔簦铮纾颍幔穑瑁?/p>

（ＨＰＬＣ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ?。悖铮睿簦澹睿簟。铮妗。悖瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪。幔悖椋洹。幔睿洹。纾幔欤酰簦澹铮欤椋睢。洌椋螅簦椋颍猓酰簦澹洹。椋睢。螅簦澹怼。幔睿洹。欤澹幔觯澹蟆。铮妗。蹋铮睿椤?/p>

ｃｅｒａ　ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓ?。悖铮欤欤澹悖簦澹洹。椋睢。洌椋妫妫澹颍澹睿簟。螅澹幔螅铮睿蟆。瑁幔洹。帷。纾颍澹幔簟。洌椋妫妫澹颍澹睿悖澹裕瑁濉。悖铮睿簦澹睿簟。簦颍澹睿洹。铮妗。悖瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪?/p>

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ｗａｓ：ｌｅａｖｅｓ＞ｆｌｏｗｅｒ?。猓酰洌蟆。幔睿洹。螅簦澹恚螅裕瑁濉。瑁椋纾瑁澹螅簟。悖铮睿簦澹睿簟。颍澹幔悖瑁澹洹。埃担担福ィ椋睢。欤澹幔觯澹蟆。悖铮欤欤澹悖簦澹洹。椋睢。疲澹猓颍酢?/p>

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ｐｒｅｓｃｒｉｂｅｄ?。悖铮睿簦澹睿簦蟆。铮妗。悖铮颍颍澹螅穑铮睿洌椋睿纭。椋睿洌澹澹蟆。椋睢。茫瑁椋睿澹螅濉。校瑁幔颍恚幔悖铮穑铮澹椋幔茫铮睿悖欤酰螅椋铮睿海裕瑁濉。猓。穑颍铮洌酰悖簦蟆?/p>

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ｔｉｏｎ?。穑颍铮螅穑澹悖簦?/p>

Ｋｅｙ?。鳎铮颍洌蟆。蹋铮睿椋悖澹颍帷。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹螅唬螅簦澹恚蟆。幔睿洹。欤澹幔觯澹?；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ；ｇａｌｕｔｅｏｌｉｎ；ＨＰＬＣ　

灰氈毛忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ?。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹蟆。龋幔睿洌弧?/p>

銀花藥材的主流品種之一　卜　?；覛置潭鳛橹小?/p>

Ｍａｚｚ．），忍冬科忍冬屬植物，具有花期長、適應性　

強、易繁殖、易采摘等特點，是我國西南、中南地區(qū)金　

藥山銀花的主要來源，其花、莖、葉均可入藥，與傳統(tǒng)　

中藥材金銀花同具清熱解毒、疏散風熱之效　?！?/p>

收稿日期：２０１３—０５—１８　

資助項目：“十二五”國家科技支撐計劃（２０１１ＢＡＤ３３Ｂ０２）　

通訊作者：孫力軍，博士，副研究員，主要研究方向：生物技術。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈｅｎｇｗｕｄｉｑｉｕ＠１２６．ｃｏｒｎ　

一３５—　

中國野生植物資源　第３２卷　

綠原酸和木犀草苷是金銀花的主要有效成分，　

許多研究報道了其在花、莖、葉等部位的含量　?！?/p>

灰氈毛忍冬與金銀花具有相同的主治與功效，２０１０　

版《中國藥典》規(guī)定山銀花的質(zhì)量控制指標成分為　

綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙；金銀花　

的質(zhì)量控制指標成分為綠原酸和木犀草苷。前期研　

究報道了灰氈毛忍冬干燥花蕾中綠原酸、灰氈毛忍　

冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷含量均高于　

《中國藥典》的規(guī)定?。?。目前對于灰氈毛忍冬有效　

藥源成分的研究主要集中在其花蕾部分，而對其莖、　

葉中活性成分的報道較少。　

每年不同季節(jié)對灰氈毛忍冬進行整形修剪產(chǎn)生　

了大量的莖葉副產(chǎn)品，而且產(chǎn)量遠高于花蕾　。本　

研究前期發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬莖葉中未能檢’？貝４出灰氈毛　

忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙。為了合理開發(fā)利用藥　

用植物資源，擴大灰氈毛忍冬的藥用部位，本文采用　

《中國藥典》所收載的金銀花質(zhì)量標準項下的含量　

測定方法，分別在不同季節(jié)（夏季、春季、秋季和冬　

季）采集同株灰氈毛忍冬來源的莖葉，分析其中綠　

原酸和木犀草苷的含量，探討灰氈毛忍冬莖葉的藥　

用價值?！?/p>

１材料　

１．１　樣品　

灰氈毛忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ?。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹蟆。龋幔睿洌弧?/p>

Ｍａｚｚ．）為南京野生植物綜合利用研究院選育品種，　

該品種花蕾呈含苞未放的棒狀，花冠一直不開裂?！?/p>

分別在２０１２年６月８日（現(xiàn)蕾后１０天）和１１月６　

日以及２０１３年２月２５日和５月３日采集同一健康　

植株的莖葉樣品（剪取帶葉枝條的１／３）用于研究?！?/p>

１．２儀器與試劑　

Ａｇｉｌｅｎｔ?。保玻埃靶透咝б合嘧V儀（ＨＰＬＣ）（美國　

Ａｇｉｌｅｎｔ公司），配有二極管陣列檢測器（ＤＡＤ）、四元　

泵和柱溫箱；ＥＬ２０４電子分析天平（中國梅特勒一托　

利多公司）；ＫＱ５２００Ｅ型超聲波清洗機（昆山市超聲　

儀器有限公司）?！?/p>

綠原酸（純度＞９５％，美國Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公　

司）；木犀草苷（純度＞９５％，批號ＬＦ２０１２Ａ０００１，南　

京春秋生物工程有限公司）。ＨＰＬＣ分析用試劑為　

譜純，包括乙腈（美國Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公司）、甲醇　

和乙酸（美國Ｔｅｄｉａ公司），超純水為娃哈哈純凈水?！?/p>

一３６—　

２方法　

２．１　灰氈毛忍冬的干燥處理　

將采摘的新鮮莖葉攤在蒸籠內(nèi)，厚４～５?。悖?，以　

蒸蓋上氣時計時３?。恚椋?，取出后疏松攤在曬盤內(nèi)，置　

于太陽光下直接曬干?！?/p>

２．２綠原酸含量的測定　

２．２．１　譜條件　

譜柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＺＯＲＢＡＸ?。牛悖欤椋穑螅濉。兀模隆茫保浮?/p>

（１５０?。恚怼粒矗丁。恚?，５　Ｉ．Ｌｍ）；柱溫２５℃；流速１．０?。恚獭?/p>

?ｒａｉｎ～；?。剑常常啊。睿?；流動相：０．４％冰醋酸（Ａ）一乙　

腈（Ｂ），梯度洗脫（０～１０?。恚椋?，８８．５％～８５％Ａ；１０　

～１２?。颍幔椋?，８５％～７１％Ａ；１２～１８　ｍｉｎ，７１％～６７％　

Ａ；１８～３０?。恚椋?，６７％～５５％Ａ；３０～３１?。颍幔椋?，５５％～　

８８．５％Ａ）。進樣量１０?。?，外標法定量?！?/p>

２．２．２溶液的制備　

對照品：精密稱取綠原酸對照品適量，置棕量　

瓶中，用５０％甲醇溶解并稀釋制成每１?。恚毯G原　

酸０．５０?。恚?。供試品：取干燥樣品細粉（過５號篩），　

精密稱定０．５?。纾茫担啊。恚倘萘科恐?，用５０％甲醇定　

容至刻度，稱定重量，超聲處理４０?。恚椋?，放冷，再稱定　

重量，用５０％甲醇補足減失的重量，搖勻，８　０００?。?　

ｍｉｎ　離心５　ｍｉｎ，取上清過０．４５?。頌V膜，即得?！?/p>

２．３木犀草苷含量的測定　

２．３．１　譜條件　

譜柱：Ａｇｉｌｅｎｔ?。冢希遥拢粒亍。牛悖欤椋穑螅濉。兀模隆茫保浮?/p>

（１５０　ｍｉｌｌ×４．６?。恚恚怠。恚恢鶞兀玻怠?；流速１．０?。恚獭?/p>

?ｍｉｎ～；入＝３５０　ｎｍ；流動相：０．４％冰醋酸（Ａ）一乙　

腈（Ｂ），梯度洗脫（０～３０?。恚椋?，９０％～７０％Ａ）；進樣　

量１Ｏ?。?，外標法定量?！?/p>

２．３．２溶液的制備　

對照品：精密稱取木犀草苷對照品適量，置棕　

量瓶中，用７０％乙醇溶解并稀釋制成每１?。恚毯福啊?/p>

Ｌ的溶液。供試品：取干燥樣品細粉（過５號篩），　

精密稱定３?。纾茫担稀。恚倘萘科恐?，用７０％乙醇定容　

至刻度，稱定重量，超聲處理１?。?，放冷，再稱定重量，　

用７０％乙醇補足減失的重量，搖勻，８?。埃埃啊。?ｍｉｎ　離　

心５?。恚椋?，取上清過０．４５?。簦虨V膜，即得?！?/p>

３結(jié)果與分析　

３．１線性關系的考量　

精密吸取不同體積的綠原酸和木犀草苷對照品　

第６期　姚正穎，等：不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷含量的分析　

溶液進樣分析，以峰面積（Ｙ）對各對照品的進樣量　

（　，?。纾┻M行線性回歸，所得兩種成分的線性回歸方　

程如下：　

綠原酸：Ｙ１＝４?。埃梗罚兀保担罚叮ǎ遥玻剑埃梗梗埂。矗€　

性范圍：０．２５～７．５０?。纾?/p>

木犀草苷：ｙ２＝１?。玻玻罚担兀玻埃埃担ǎ遥玻剑埃梗梗贰。丁?/p>

，線性范圍：０．１６～１．６０?。纾?/p>

結(jié)果表明各對照品在其相應的進樣量范圍內(nèi)與　

峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系。綠原酸和木犀草苷的　

ＨＰＬＣ譜峰分別見圖１ａ和圖１ｂ?！?/p>

ｂ　

２．５　５?。罚怠。保稀。保怠?/p>

ｔ／ｍｉｎ?。簦恚椋睢?/p>

Ａ　

Ｂ?。ⅰ。啊?/p>

２．５?。怠。罚怠。保稀。保怠。玻啊?/p>

ｔ／ｒａｉｎ　ｔ／ｍｉｎ　

ａ：綠原酸標準品；ｂ：木犀草苷標準品；　

Ａ：供試品中的綠原酸；Ｂ：供試品中的木犀覃苷　

圖１綠原酸和木犀草苷的ＨＰＬＣ圖　

３．２精密度實驗　

分別吸取綠原酸對照品溶液和木犀草苷對照品　

溶液，按各自的譜條件測定綠原酸和木犀草苷峰　

面積的ＲＳＤ（　＝５）分別為１．０２％和１．１８％。以上　

數(shù)據(jù)表明，該實驗精密性良好?！?/p>

３．３穩(wěn)定性實驗　

取同一供試品溶液，分別于０、４、６、１２、２４?。柽M　

樣測定的綠原酸和木犀草苷峰面積的ＲＳＤ（ｎ＝５）　

分別為１．１２％和２．４３％，表明供試品溶液中各組分　

在２４?。鑳?nèi)穩(wěn)定?！?/p>

３．４重復性實驗　

分別按照２．２和２．３所述方法配制供試品溶液　

５份，按照各自的譜條件測定綠原酸和木犀草苷　

的含量ＲＳＤ（ｎ＝５）分別為２．８８％和１．４８％，表明　

本方法有良好的重復性。　

３．５加樣回收率　

精密稱取一定量已知含量的樣品，分別加入對　

照品適量，按照上述方法制備供試品溶液，測定各組　

分含量計算回收率，結(jié)果見表１。　

表１綠原酸和木犀草苷加樣回收率試驗結(jié)果（ｎ＝５）　

３．６樣品的測定　

采用ＨＰＬＣ檢測綠原酸（圖１Ａ）和木犀草苷（圖　

１Ｂ），各組分均能良好分離。以干燥品來計算各樣品　

中活性組分的含量（％，ｇ?ｇ?。?，結(jié)果如表２所示。前　

期研究可知經(jīng)蒸制曬干處理的的灰氈毛忍冬花蕾中　

綠原酸含量為３．１５６％，木犀草苷含量為０．１２２％［９ｊ?！?/p>

將莖葉中測得的綠原酸及木犀草苷含量與同時期花　

蕾中的含量進行比較，結(jié)果如圖２所示。

∞　∞　

∞　∞　加　

表２不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和　

木犀草苷的含量（ｘ±ｓ，／／，＝３）?。ァ?/p>

綠原酸含量　木犀草苷含量　

葉　莖　葉　莖　

圃綠原酸（葉）　口綠原酸（莖）　

—書一木犀草苷（葉）—日一木犀草苷（莖）　

Ｏ　∞?。稀∪纭。稀〖印。啊。啊?/p>

玨　

趕　

夏季　秋季　冬季　吞季　

（６月份）（１１月份）（２月份）（５月份）　

圖２不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷的　

相對含量（％，以夏季花期花營中各物質(zhì)含量為對照）　

由實驗數(shù)據(jù)可見，綠原酸和木犀草苷在不同季　

節(jié)的灰氈毛忍冬的花、莖、葉中均有分布，且含量差　

別明顯。綠原酸含量總體趨勢為：花＞葉＞莖。秋　

季（１１月份）的葉片樣品含量最高（３．０３１％），約為　

同一生長期花蕾綠原酸含量的９６％；在夏季（６月　

份）、冬季（２月份）和春季（５月份）采摘的葉片樣品　

中，綠原酸含量約為花蕾中含量的５４％～７０％，；在　

不同季節(jié)的莖干樣品中，綠原酸含量較低，僅為其在　

一３７一　

酯　

０　

Ｏ　

中國野生植物資源　第３２卷　

花蕾中含量的１６％一２４％。木犀草苷含量總趨勢　

為：葉＞花和莖（春季除外）。以冬季的葉片樣品含　

量最高（０．５５８％），約為同一生長期花蕾中木犀草　

苷含量的４．６倍；夏季和秋季的葉片樣品中木犀草　

苷含量分別是花蕾中含量的３．７和３．９倍；春季葉　

片中含量較低，約為花蕾中含量的８２％；在不同季　

節(jié)的莖干樣品中，除夏季花期樣品中木犀草苷含量　

約為其在花蕾中含量的２．１倍外，其它三季的木犀　

草苷含量較低，約為花蕾中含量的２４％～７０％?！?/p>

４討論　

綠原酸是金銀花和山銀花的主要有效成分和活　

性成分，具有顯著的抗病毒、調(diào)節(jié)糖脂代謝等功　

能　。依據(jù)２０１０年版《中國藥典》，山銀花的干燥　

花蕾中綠原酸含量不低于２．０％＿ｌ　。在本研究中，　

灰氈毛忍冬的夏季和秋季葉片樣品中的綠原酸含量　

完全符合藥典的規(guī)定，以秋季葉片中綠原酸含量最　

高（３．０３１％）。諸多研究報道了金銀花的不同部位　

均含有綠原酸，按含量依次為花＞葉＞莖＿４?。省１尽?/p>

研究結(jié)果與金銀花中綠原酸含量分布趨勢一致。而　

滕昱伯等研究發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬的主要活性成分綠原　

酸在各部位含量為花＞莖＞葉＿１　，這可能與灰氈　

毛忍冬的產(chǎn)地、品種、采摘季節(jié)及提取工藝等因素存　

在差異有關?！?/p>

木犀草苷是金銀花的另一主要特征成分，具有　

抗菌消炎的功效，藥典規(guī)定其在金銀花干燥花蕾中　

含量不低于０．０５％?。保玻荨Ｓ捎谀鞠蒈赵诨覛置獭?/p>

冬花蕾中的含量過低，關于其含量檢測的報道較　

少¨ｌ１Ｈ?。?。我們在前期研究中測得經(jīng)蒸制曬干處理　

的灰氈毛忍冬干燥花蕾中的木犀草苷含量為　

０．１２２％，高于藥典中金銀花項下指標的規(guī)定?。埂。?。本　

研究發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬莖葉中含有木犀草苷尚屬首次　

報道。在不同季節(jié)采摘的莖葉樣品中，除冬季的莖　

干樣品外，其它時期莖葉樣品中木犀草苷含量均高　

于藥典規(guī)定的下限值。付慶霞報道了木犀草苷在金　

銀花花期的葉片中含量最高，幾乎是花蕾與莖中含　

量的３倍　。本研究結(jié)果顯示，夏秋冬三季葉片中　

的木犀草苷含量遠高于花和莖，尤以冬季的葉片樣　

品中含量最高（０．５５８％），是花蕾中含量的４．６倍?！?/p>

本研究采用超聲波提取和ＨＰＬＣ，對不同季節(jié)　

灰氈毛忍冬莖葉樣品中的綠原酸和木犀草苷含量進　

行檢測，方法準確、穩(wěn)定、可靠。秋季（１１月份）采摘　

的灰氈毛忍冬葉中的綠原酸為３．０３１％，為同一生　

長時期花蕾中含量的９５％；冬季（２月份）采摘的灰　

氈毛忍冬葉中的木犀草苷含量為０．５５８％，是花蕾　

中含量的４．６倍，二者均高于《中國藥典》的規(guī)定標　

準。因此，在秋冬季節(jié)對灰氈毛忍冬進行整型修剪，　

葉片等副產(chǎn)物資源豐富，藥源成分充足，灰氈毛忍冬　

的藥用價值將得以高效開發(fā)利用?！?/p>

參考文獻：　

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