自動化測定化學(xué)介導(dǎo)的細胞毒性機制

基于體外細胞的測定是評估測試化合物毒性的合適且經(jīng)濟的方法，特別是在藥物發(fā)現(xiàn)研究計劃中。通常的工作流程包括測試化合物滴定，應(yīng)用于細胞和孵育數(shù)天。所有的細胞毒性測定特異性液體處理任務(wù)是通過使用CyBio進行® FELIX(耶拿)儀器作為一個獨立的，完全自動化的系統(tǒng)。

通過使用開發(fā)用于定量感興趣的生物標(biāo)志物的試劑來評估測試化合物的效果。簡而言之，產(chǎn)生細胞毒性作用的化合物或治療通過引起顯著的形態(tài)變化，負面影響復(fù)制速率或?qū)е驴尚屑毎嫈?shù)減少而這樣做。從體外方法獲得的信息是識別潛在毒性問題的重要前體。在機械細胞毒性分析中，使用獨特的生物標(biāo)志物來報告細胞的健康狀況。在本文中，使用一組三個測定來評估與細胞數(shù)量，細胞凋亡和膜完整性(細胞毒性)的變化相關(guān)的生物標(biāo)志物。

當(dāng)組合使用時，這些生物標(biāo)志物可以幫助區(qū)分凋亡，壞死或生長停滯的細胞群。表1描述了用于該研究的測定。

所述CellTox ™綠色測定法與胱天蛋白酶-GLO多路復(fù)用® 3/7測定或的CellTiter-GLO ® 2.0，以減少樣品處理和保存細胞樣品。胱天蛋白酶格洛的檢測化學(xué)® 3/7和的CellTiter-GLO ®2.0是不兼容的。因此，組裝一式兩份樣品以分別評估細胞凋亡和細胞活力。對于這種分析工作流程，與連續(xù)培養(yǎng)的細胞相比，冷凍，解凍和使用細胞提供了合適的選擇。解凍并使用這些解凍和使用的細胞，并在解凍后直接接種，不需要任何先前的細胞培養(yǎng)活性。融合和傳代數(shù)可以影響培養(yǎng)細胞的生物學(xué)性能，使用解凍和使用細胞可以克服這些挑戰(zhàn)。

通過將實驗室自動化用于所有實驗步驟，使得分析工作流程更有效。本文介紹了自動連續(xù)滴定和將測試化合物應(yīng)用于測定板，以及添加試劑和細胞。結(jié)合自動化保證了可靠的實驗設(shè)置，避免了用戶對用戶移液的可變性并提高了實驗室效率。

對于這種應(yīng)用，冷凍即時的HepG2細胞(細胞培養(yǎng)服務(wù))，人肝細胞系，GloMax ®用于檢測熒光和發(fā)光測定信號的查詢多模檢測系統(tǒng)(Promega)，和一個CyBio ®菲利克斯儀器為所有液體處理步驟已經(jīng)受雇了。為了采用這種自動化分析過程，用于實驗步驟的最短時間和注意力就足夠了。自動化過程允許在384孔微孔板格式中一式四份地測試多達八種化合物。當(dāng)優(yōu)選時間過程研究時，可以組裝復(fù)制的板。

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