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      CRISPR基礎(chǔ)編輯器進(jìn)行診斷和補救檢查
      
			
      
				2019-03-06 09:45:25
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      在進(jìn)行測試，徹底和系統(tǒng)測試之前，基于CRISPR的編輯工具是否達(dá)到等級或需要補救工作尚不清楚。因此，位于韓國基礎(chǔ)科學(xué)研究所(IBS)的科學(xué)家正在管理與標(biāo)準(zhǔn)化測試相當(dāng)?shù)腃RISPR?？茖W(xué)家提供不同的指導(dǎo)RNA，而不是用#2鉛筆和填充橢圓形片材呈現(xiàn)CRISPR工具。然后科學(xué)家們使用基因組測序來檢查諸如脫靶效應(yīng)之類的錯誤。
      

      CRISPR基礎(chǔ)編輯器進(jìn)行診斷和補救檢查
      

      最近，由IBS基因工程中心主任兼教授Jin-Soo Kim領(lǐng)導(dǎo)的IBS團(tuán)隊研究了人類細(xì)胞中腺嘌呤堿基編輯ABE7.10的錯誤率。這些編輯在RNA指導(dǎo)指定的DNA位點完成腺嘌呤到鳥嘌呤的變化。
      

      科學(xué)家報告說，他們確定了受ABE7.10影響的人類基因組位置，并掃描了超出目標(biāo)的誤差。為此，他們使用了改良版Digenome-seq，這是一種測序技術(shù)，他們已經(jīng)用它來成功確定胞嘧啶堿基編輯器(CBE)，CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1等的準(zhǔn)確性。
      

      他們用7個指導(dǎo)RNA測試ABE7.10，對應(yīng)于7個DNA靶標(biāo)字母，并將結(jié)果與??常見的CBE和Cas9核酸酶進(jìn)行比較。修改后的Digenome-seq可以檢測整個人類基因組中平均60個脫靶錯誤。有趣的是，盡管這三種蛋白質(zhì)被設(shè)計成針對同一個位點，但它們識別出不同的脫靶點。
      

      3月4日，Nature Biotechnology雜志發(fā)表了一篇題為“ CRISPR RNA指導(dǎo)的腺嘌呤堿基編輯的全基因組特異性靶向特異性 ”的文章。該文章描述了科學(xué)家如何在含有肌苷的部位產(chǎn)生雙鏈斷裂。通過在體外用腺嘌呤堿基編輯器7.10蛋白質(zhì) - 指導(dǎo)RNA復(fù)合物和內(nèi)切核酸酶V或人烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和核酸內(nèi)切酶VIII的組合處理人基因組DNA來進(jìn)行腺嘌呤脫氨基因。
      

      該文章的作者寫道：“Digenome-seq檢測腺嘌呤堿基編輯的脫靶位點，取代頻率為0.1%或更高。” “我們顯示腺嘌呤堿基編輯器7.10，胞嘧啶堿基編輯器BE3和未修飾的CRISPR相關(guān)蛋白9(Cas9)通常識別不同的脫靶位點，突出了對其全基因組特異性進(jìn)行獨立評估的必要性。”
      

      IBS團(tuán)隊還展示了一些策略來抑制脫靶修改的數(shù)量。在指南RNA末尾添加幾個Gs減少了脫靶錯誤，以及使用不同類型的Cas9(由2018年由同一團(tuán)隊開發(fā)的Sniper-Cas9)和ABE7.10的交付。通過預(yù)裝配的核糖核蛋白，而不是通過質(zhì)粒。
      

      展望未來，該團(tuán)隊旨在為ABE的發(fā)展做出貢獻(xiàn)，以更加精確和有效的方式引入所需的單字母更改。“隨著基礎(chǔ)編輯器的準(zhǔn)確性得到證實，我們預(yù)計它將在未來的醫(yī)療和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，”Kim說。
      
			

			
        
      
			
      
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