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      解析活體基因?qū)敕椒?  活體電穿孔法有什么特點？
      
			
      
				2020-08-05 10:49:50
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			  來源：中華網(wǎng)
			
      
		
      
				
		
      
			
      你知道什么是外源基因嗎?你知道什么是活體電穿孔法嗎?據(jù)最新消息顯示，活體電穿孔法是將外源基因通過電場作用，導(dǎo)入動物目標(biāo)組織或器官。由于這種方法能有效導(dǎo)入外源基因，可在多種組織器官上應(yīng)用,并且效率較高。因此，這種通道能維持幾毫秒到幾秒,然后自行恢復(fù)。
      

      

      活體電穿孔簡介
      

      近年來活體電穿孔法用于轉(zhuǎn)基因研究的報道不斷增多,在基因治療方面的優(yōu)勢也日趨顯著,是一種很好的活體基因?qū)敕椒ā?/p>

      活體電穿孔法可用于檢測瞬時表達系統(tǒng)中載體的表達狀況。大量的研究表明活體電穿孔法在基因治療方面有非常好的應(yīng)用前景。因此目國內(nèi)外對活體電穿孔法介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)移的研究越來越多。
      

      活體電穿孔的法的特點
      

      活體電穿孔法基因?qū)牒捅磉_效率較高,它的特點主要在以下幾個方面:
      

      首先,靶器官的選擇面廣
      

      理論上任何組織和器官都可以作為活體電穿孔的靶器官。
      

      在用于基因治療方面，要考慮到靶器官組織生理特性。如果所選擇的局部組織細胞不能把所轉(zhuǎn)移基因的表達產(chǎn)物分泌到外周血液循環(huán)中,則在某種意義上說已失去了基因?qū)氲膬r值,這在基因治療中是關(guān)鍵性的問題。當(dāng)使用組織特異性表達載體時,研究人員應(yīng)根據(jù)所構(gòu)建的表達載體來選擇基因轉(zhuǎn)移和表達的靶器官組織。例如魚精蛋白21 啟動子可指導(dǎo)外源基因在精母細胞中特異性表達,以小鼠的睪丸作為靶器官將含有魚精蛋白21啟動子的表達載體導(dǎo)入,獲得外源基因的表達量遠遠高于該基因在肝臟和骨骼肌中的表達。
      

      其次,對導(dǎo)入的外源基因片段的大小沒有限制
      

      從幾KB 或十幾KB 的表達載體, 到100～200KB 的YAC、BAC 基因組,都有成功導(dǎo)入并獲得表達的報道。
      

      此外活體電穿孔法操作簡單快速,電穿孔的時間只有幾秒鐘,而且DNA片段不需要特殊的純化操作。
      

      但電穿孔法也存在一些的缺點:首先,外源基因表達持續(xù)的時間很短,雖然外源基因?qū)牒笞羁炜稍?15 小時有表達,但大多1～2 月后表達量降至很低。外源基因表達的時間主要由于所構(gòu)建的表達載體和基因?qū)氲陌屑毎M織器官不同而存在巨大差異。
      

      由于應(yīng)用不同的表達載體,Muramatsu 在小鼠肝臟進行電穿孔7天后則檢測不到外源基因的表達,而Heller 21 天后還可以檢測到外源基因的表達。如果選擇代謝和酶活動旺盛的組織器官如肝臟,則表達持續(xù)時間會較短,表達時間在1 個月以內(nèi),但以骨骼肌為靶組織,表達可持續(xù)15個月。
      

      值得關(guān)注的是，到目前為止,非病毒載體的活體基因?qū)敕椒ㄓ兄苯幼⑸浞?、脂質(zhì)體法、基因槍法、電穿孔法等。每一種方法都有其各自的特殊性,因此很難將這幾種方法進行簡單的比較。
      
			

			
        
      
			
      
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