第17章 支原體
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第17章支原體
支原體(mycoplasma)是目前已知一類沒有細胞壁能在無生命培養(yǎng)基上生長
繁殖的最小的原核細胞型微生物。因能形成有分枝的長絲,故稱支原體。
特點:因缺乏細胞壁,呈高度的多形性,細胞膜含固醇,能通過0.45um濾
菌器;以二分裂繁殖為主,含DNA與RNA兩種核酸。
支原體過去曾稱為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like
organism,PPLO),1967年正式定為支原體。支原體的種類較多,在自然界的分
布廣泛,并各有特定的宿主,包括人、家畜、家禽及實驗動物。實驗室用于組
織培養(yǎng)的材料,常易被支原體污染給工作帶來地定困難。
第一節(jié)概述
支原體因其沒有細胞壁故歸屬于柔膜體綱(Mollicute)的支原體目
(Mycoplasmatales)3個科:
①支原體科(Mycoplasmataceae),在支原體科中又分支原體(Mycoplasma)
和脲原體(Ureaplama)2個屬。支原體屬現(xiàn)知有64個種,而脲原體屬僅2個種。
其中對人致病的主要為肺炎支原體(niae)、人型支原體(s)、
生殖器支原體(lium)、穿透支原體(aus)和溶脲脲原體
(ticum)。
②無膽甾原體科(Acholeplasma-taceae),生長時不需要外源性膽固醇。
③螺原體科(Spiroplasmataceae),生長至一定階段呈螺形。
一、生物學性狀體
(一)形態(tài)與結構
1.形態(tài)與大?。褐гw的大小為0.2~
0.3um,可通過濾菌器,常給細胞培養(yǎng)工作帶來
污染的麻煩。無細胞壁,不能維持固定的形態(tài)
而呈現(xiàn)多形性,呈球形、球桿形、長絲狀及分
支狀等。圖17-1
2.革蘭氏染陰性,但不易著,故常用Giemsa染法將其染成淡紫。
3.結構:支原體的細胞膜由三層結構組成,其中內、外層的主要成分是蛋
白質,而中層為脂質。脂質中膽固醇含量較多,約占36%,對保持細胞膜的完整
性具有一定作用。凡能作用于膽固醇的物質(如二性霉素B、皂素等)均可引起
支原體膜的破壞而使支原體死亡。有的支原體在細胞膜外還有一層由多聚糖構
成的莢膜,有毒性,是支原體的一種致病因素。肺炎支原體的一端有一種特殊
的頂端結構,能使支原體粘附于呼吸道粘膜上皮細胞表面,與致病性有關。
4.基因組為一環(huán)狀以雙鏈DNA,分子量?。▋H有大腸桿菌的五分之一),合
成與代謝很有限。
(二)培養(yǎng)特性
1.營養(yǎng)要求比一般細菌高,除基礎營養(yǎng)物質外還需加入10~20%人或動物血
清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8~8.0之間,低于7.0則死亡,但解
脲脲原體最適pH6.0~6.5,因在培養(yǎng)時溶脲脲原體分解尿素產氨,可使培養(yǎng)基
pH升高。當培養(yǎng)基指示劑變即需移種。否則將迅速死亡。
2.大多數(shù)兼性厭氧,僅個別菌株專性厭氧。有些菌株在初分離時加入5%CO2
生長更好。
3.生長緩慢,在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上孵育
2~3天出現(xiàn)典型的“荷包蛋樣”菌落:圓形(直徑:肺
炎支原體100~150μm,溶脲脲原體10~40μm),核心
部分較厚,向下長入培養(yǎng)基,周邊為一層薄的透明顆粒
區(qū)(圖17-2)。此外,支原體還能在圖17-2
雞胚絨毛尿囊膜或培養(yǎng)細胞中生長。4.繁殖方式多樣,主要為二分裂繁殖,還
有分枝、出芽等方式,由于支原體分裂和其DNA復制不同步,可形成多核長絲
體。
(三)生化反應
一般能分解葡萄糖的支原體則不能利用精氨酸,能利用精氨酸的則不能分
解葡萄糖,據(jù)此可將支原體分為兩類(見表17-1)。溶脲脲原體不能利用葡萄
糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。
表17-1人類支原體的主要生物學性狀
名稱需要膽固醇分解葡萄糖分解精氨酸吸附紅細胞
肺炎支原體++-+
人型支原體+-+-
生殖支原體+---
穿透支原體++-+
溶脲脲原體----
(四)抗原結構:支原體細胞膜上的抗原結構由蛋白質和糖脂組成。各種
支原體均有其特有的抗原結構,交叉較少,在鑒定支原體時有重要意義。補體
結合試驗取決于抗原的糖脂部分,ELISA試驗取決于抗原的蛋白質部分。支原體
的血清抗體可用作生長抑制試驗(growthinhibitiontest,GIT)和代謝抑制
試驗(metabolicinhibitiontest,MIT)。應用這兩種方法還可將某些支原體分
成若干血清型,如溶脲脲原體可分為16型。
試驗:操作步驟與藥敏試驗的紙片法相似,將沾有特異性抗血清紙片
貼于劃有支原體的瓊脂平板表面,若兩者相應則紙片周圍生長的菌落受到抑制。
試驗:將支原體接種在一個含有血清與酚紅的葡萄糖培養(yǎng)基中,若抗
體與支原體相應,則支原體的生成、代謝受到抑制,酚紅不變。
(五)抵抗力
1.支原體因無細胞壁對理化因素的影響比細菌敏感,容易被消毒劑滅活,
對重金屬鹽、石炭酸、來蘇爾和一些表面活性劑較細菌敏感,但對醋酸鉈、結
晶紫的抵抗力大于細菌。
2.支原體對熱的抵抗力與細菌相似。
3.對環(huán)境滲透壓敏感,滲透壓的突變可致細胞破裂。
4.對影響細胞壁合成的抗生素如青霉素不敏感,對干擾蛋白質合成的抗生
素如紅霉素、強力霉素、四環(huán)素、鏈霉素及氯霉素等敏感。
二、支原體與L型細菌的區(qū)別
L型細菌是在抗生素、溶菌酶等作用下變成的一種細胞壁缺陷型細菌,其許
多特性與支原體相似,在鑒定時很有必要將二者區(qū)別開來(見表)。
表19-2支原體與L型細菌的區(qū)別
支原體L型細菌
自然界中廣泛存在自然界很少存在
絕大多數(shù)生長需膽固醇生長不一定需要膽固醇
在一般培養(yǎng)基中穩(wěn)定大多需高滲培養(yǎng)
在遺傳上與細菌無關,且無論在什在遺傳上與原菌相關,并可在誘
么條件下也不能變成細菌導因素去除后回復為原菌
菌落較小,0.1~0.3mm菌落稍大,0.5~1.0mm
三、主要病原性支原體
(一)肺炎支原體(niae)
1.傳播途徑:主要經呼吸道(飛沫)傳播
2.易感人:發(fā)病率以青少年最高
3.發(fā)病季節(jié):一年四季均可發(fā)生,但多在秋冬時節(jié)。
4.潛伏期:2~3周
5.所致疾病:肺炎支原體是人類支原體肺炎的病原體,引起的肺炎占非細
菌性肺炎的1/2左右。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主,有時并發(fā)支
氣管肺炎,稱為原發(fā)性非典型性肺炎。臨床癥狀較輕,甚至根本無癥狀,若有
也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀,但也有個別死亡報道。
(二)泌尿生殖道感染支原體
引起泌尿生殖道感染的支原體主要有溶脲脲原體、人型支原體和生殖支原
體,現(xiàn)已被列為性傳播性疾病的病原體。在非淋菌性尿道炎(NGU)中,感染率
僅次于衣原體。
1.溶脲脲原體(ticum):又稱T株支原體(Tinystrain)。通常
寄居在人的泌尿生殖道粘膜,引起非細菌性尿道炎,也能引起盆腔等部位的感
染。還可通過胎盤感染胎兒,可致流產、早產、死胎;在分娩時感染新生兒,
可引起呼吸道感染或中樞神經系統(tǒng)的癥狀;還可引起婦女不孕。
溶脲脲原體引起不的原因:
(1)吸附于精子表面,阻止精子的運動。
(2)產生神經氨酸樣物質干擾精子和卵子的結合。
(3)與精子有共同抗原成分,對精子可造成免疫損傷。
溶脲脲原體的分離可用加尿素和酚紅的含血清支原體肉湯。肉湯中可加青
霉素抑制雜菌的生長。溶脲脲原體具有尿素酶,可分解尿素產氨,使酚紅變紅。
在固體培養(yǎng)基上用低倍鏡觀察,可見有微小的荷包蛋樣菌落或顆粒樣菌落生長。
免疫斑點試驗。
2.人型支原體(s):能引起滲出性咽炎及尿道炎,也與卵巢膿
腫、產褥熱等有關。
3.生殖支原體(lium):與泌尿生殖道感染有關。
4.發(fā)酵支原體(tans):與呼吸道疾病的關系更為密切。也與某些類
風濕性關節(jié)炎的發(fā)病有關。
5.口腔支原體()與唾液支原體(rium):寄居在人的口咽
部,均為正常菌。
(三)穿透支原體
穿透支原體是1990年首次從1例HIV陽性艾滋病患者尿中分離出的一種新
支原體,形態(tài)為桿狀或長瓶狀。
四、實驗室診斷
(一)分離培養(yǎng)與鑒定:
加10%~20%馬或小牛血清于基礎培養(yǎng)基中。初次分離培養(yǎng)生長緩慢,菌落
呈典型的油煎蛋樣。治療用紅霉素、四環(huán)素、強力霉素等高度敏感的抗生素。
分離的支原體經形態(tài)、生化反應作初步鑒定,進一步經生長抑制試驗(GIT)與
代謝抑制試驗(GIT)確定。
(一)抗體的檢測:補體結合試驗或放射免疫技術等。
(二)凝集試驗及株鏈菌凝集試驗。
(四)DNA探針
(五)PCR技術
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