第十二章分泌物檢查2003
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第十二章分泌物檢查
第一節(jié)標(biāo)本的采集
分泌物(vaginaldischarge)為女性生殖性系統(tǒng)分泌的液體,俗稱“白帶”。主要來(lái)
自宮頸腺體、前庭大腺,此外還有子宮內(nèi)膜、粘膜的分泌物等。
標(biāo)本采集前24小時(shí),禁止,盆浴、檢查、灌洗及局部是藥等,以名
勝影響檢查結(jié)果。取材所用消毒的刮板,吸管或棉拭子必須清潔干燥,不粘有任何化學(xué)藥
品或潤(rùn)滑劑。窺器插入前必要時(shí)可用少許生理鹽水濕潤(rùn)。根據(jù)不同的檢查目的可自不
同部位取材。一般采用鹽水浸濕的棉拭子睚深部或穹后部、宮頸管口等處取材,
制備成生理鹽水涂片以觀察分泌物。生理鹽水懸滴可檢查滴蟲(chóng),涂制成薄片以95%乙
醇固定,經(jīng)過(guò)巴氏染,吉姆薩染升革蘭氏染,進(jìn)行腫瘤細(xì)胞篩查或病原微生物檢查。
第二節(jié)外觀及清潔度檢查
在生量狀態(tài)下,女性生殖系統(tǒng)由于的組織解剖學(xué)和生物化學(xué)特點(diǎn)足以防御外界病
原微生物的侵襲。從新生兒到青老大爺期,雙側(cè)大小合攏嚴(yán)緊,外女膜完整,前
后壁貼接,使管腔閉合,以青春期后,由于雌激素的影響,上的上皮由單層變?yōu)閺?fù)層。
上皮細(xì)胞內(nèi)底層外,均含有不同量的糖原,同時(shí)受卵巢功能的影響,有周期的變化及脫落,
脫落后細(xì)胞破壞放出糖原,借桿菌作用,將糖原轉(zhuǎn)化為酸,使PH保持在4-4.5
之間,只有桿菌能在此環(huán)境中生存。因此在正常健康婦女,本身有自凈作用,形
成自然防御功能。
一、一般性狀檢查
檢查正常分泌物為白稀糊狀,一般無(wú)氣味,量多少不特恙雌激素水平高低及生
殖器官充血情況有關(guān),于近排卵期白帶量多,清澈透明、稀薄似雞旦清,排卵期2-3天后
白帶混濁粘稠、量少、行經(jīng)前量又增加。妊娠期白帶量較多。
白帶異??杀憩F(xiàn)為、質(zhì)、量的改變:
1.大量無(wú)包透明粘白帶常見(jiàn)于應(yīng)用雌激素藥物后及卵巢顆粒細(xì)胞瘤時(shí)。
2.膿性白帶:黃或綱綠有臭味,多為滴蟲(chóng)或化膿性細(xì)菌性感染引起的;泡沫疚狀
膿性白帶,常見(jiàn)于滴蟲(chóng)性炎;其它膿性白帶見(jiàn)于慢性宮頸炎、老年性炎、子宮內(nèi)
膜炎、宮腔積膿、異物等。
3.豆腐渣樣白帶:呈豆腐查樣或凝狀小碎塊,為念珠菌炎所特有,常伴有外陰
瘙癢。
4.血性白帶:內(nèi)混有血液,血量多少不定,有特殊臭味。對(duì)這類白帶應(yīng)警惕惡性腫瘤
的可能,如宮頸癌、宮體癌等,有時(shí)某些宮頸息肉、子宮粘膜下肌瘤、老年性炎、重
度慢性宮頸炎和宮內(nèi)節(jié)育器引起的副反應(yīng)也可在白帶中見(jiàn)到血液。
5.黃水樣白帶:由于病變組織的變性、環(huán)死所致。常發(fā)生于子宮粘膜下肌瘤,宮頸
癌、子宮體癌、輸卵管癌等。
二、清潔度檢查
將分泌物加生理鹽水作涂片,用高倍鏡檢查,主要依靠白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、
桿菌與雜菌的多少劃分清潔度,見(jiàn)表12-1。
表12-1分泌物清潔度分級(jí)
清潔度所見(jiàn)成分
Ⅰ度
Ⅱ度
Ⅲ度
Ⅳ度
臨床意義
大量桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞0-5/HPF,雜菌無(wú)或極少正常
中等量桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞10-15/HPF,雜菌少量亦屬正常
少量桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞15-50/HPF,雜菌較多
無(wú)桿菌有少量上皮細(xì)胞,白細(xì)胞>30/HPF,大量雜菌
提示有炎癥
多見(jiàn)于嚴(yán)重的炎
卵巢功能不足、雌激素減低,上皮增生較差時(shí)可見(jiàn)到桿菌減少,易感染雜菌。
單純清潔度不好而未發(fā)現(xiàn)病原微生物,為非特異性了道炎。當(dāng)清潔度為Ⅲ~Ⅳ度時(shí)??赏?/p>
時(shí)發(fā)現(xiàn)病原微生物,提示存在感染引起的炎。
第三節(jié)微生物檢查
(一)原蟲(chóng)
引起感染的原蟲(chóng)主要有是毛滴蟲(chóng),可致滴蟲(chóng)性炎。病人外陰灼熱痛、瘙
癢,分泌物呈稀膿性或泡沫狀,將此分泌物采用生理鹽水懸滴法置于低倍顯微鏡下觀
察,可見(jiàn)波動(dòng)狀或螺旋狀運(yùn)動(dòng)的蟲(chóng)體將周圍白細(xì)胞或上皮細(xì)胞推動(dòng)。在高倍鏡下可見(jiàn)蟲(chóng)體
為8-45μm,呈項(xiàng)寬尾尖倒置梨形,大小多為白細(xì)胞的2-3倍,蟲(chóng)體項(xiàng)端有前鞭毛4根,后
端有后鞭毛一根,體側(cè)有漢動(dòng)膜,借以移動(dòng)。此時(shí)分泌物的清潔度為Ⅲ、Ⅳ度。
貌岸然毛滴蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖的適宜溫度為25-42攝氏度,故在檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意保溫,方
可觀察到毛滴蟲(chóng)的活動(dòng)。分泌物中查到分泌物滴蟲(chóng)是診斷滴蟲(chóng)性炎的依
據(jù),近年來(lái)采用毛滴蟲(chóng)單抗制的膠免疫凝聚法劑盒可提高滴蟲(chóng)性炎的診斷率。
在分泌物中見(jiàn)到溶組織阿米巴滋養(yǎng)體時(shí),提示為阿米巴性炎。
(二)真菌
真菌有時(shí)在中存奪而無(wú)害,在抵抗力減低時(shí)容易發(fā)病,真菌性炎發(fā)
找到真菌為診斷依據(jù),真菌多為白假絲酵母菌,偶見(jiàn)纖毛菌、放線菌等。采用
懸滴法于低倍鏡下可見(jiàn)到白絲假酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲。如取分泌物涂片并
時(shí)行革蘭氏染后油觀察,可見(jiàn)到卵圓形革蘭氏陽(yáng)性孢子或與出芽細(xì)胞相連接的假菌絲,
成鏈狀及分支狀。
(三)淋病奈瑟菌
淋病是目前世界上發(fā)病率較高的性傳播疾病之一。國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)約占門診性病患者的40%。
人類是淋病奈瑟菌唯一的宿主。在性關(guān)系紊亂情況下造成在人中的廣泛傳染及流行。臨
床上多婁箐南現(xiàn)急性癥狀,少數(shù)為慢性過(guò)程。淋病奈瑟菌的檢查首先采用涂片法,發(fā)宮頸
管內(nèi)分泌物涂片的陽(yáng)性率最高,為100%;上1/3部分為84%;口處為35%。一
般需將宮頸表面膿液試去,用棉拭子插入宮頸管1厘米深處停留10-30s,旋轉(zhuǎn)一周取出,
將分泌生在玻片上,革蘭氏染后油鏡檢查,找革蘭氏性雙球菌,形似腎或咖啡豆
狀,凹面相對(duì),除散在于白細(xì)胞之間外,還可見(jiàn)其被吞噬于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)之內(nèi),因淋病
奈瑟菌對(duì)各種理化因子抵抗力弱,涂片法可被漏診,必要時(shí)可進(jìn)行淋病奈瑟菌培養(yǎng),且有
利于菌株分型和藥過(guò)敏試驗(yàn)。近年來(lái)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)的淋病抗血清,可與受檢查
者宮頸分泌物中的淋病奈瑟菌結(jié)合,采用免疫熒光技術(shù),在30分鐘內(nèi)即可準(zhǔn)確得出結(jié)果。
比培養(yǎng)法快,比涂片支準(zhǔn)確,較易掌握。此外運(yùn)用PCR技術(shù)也可對(duì)淋病奈瑟菌過(guò)少,雜
菌過(guò)多的標(biāo)本進(jìn)行診斷。
對(duì)于淋病非顯性感染者,其淋病奈瑟菌的鏡檢出和培養(yǎng)檢查常為陰性,但卻是淋病的
重要傳染源。為此,近年來(lái)制備了多種檢測(cè)淋病奈瑟菌的基因探針。大部分淋病奈瑟菌內(nèi)
含有多拷貝的4。2kb隱蔽性質(zhì)粒,此外淋病奈瑟菌青毒素抗性主要是由編碼β-骨酰胺酶
的質(zhì)粒決定的,用這兩種質(zhì)粒標(biāo)記的探針與分泌物進(jìn)行斑點(diǎn)雜交可分別探測(cè)淋病奈瑟
菌及其抗藥性。其特異性敏感性均很高。目前還制備出淋病奈瑟菌DNA探針、菌毛探針
和RNA探針,也建立了各種特異性高,敏感性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速的右面放射性標(biāo)記的檢測(cè)系
統(tǒng),成為淋病奈瑟菌及其抗藥性檢查的重要方法。
(四)加德鈉菌
加德鈉菌(Gardherellavaginalis;GV)和某些厭氧菌共同引起的細(xì)菌性病亦屬
于性傳播疾病之一。該菌還能以非性行為方式傳播。除引起病外,尚可引起早產(chǎn)、產(chǎn)
褥熱、新生兒敗血癥、絨毛膜羊膜炎、不后敗血癥和膿毒血癥等。加德鈉菌產(chǎn)生高濃
度的丙酮酸的氨基酸,可被厭氧菌脫羧基生成相應(yīng)的胺,引起皮膚粘膜過(guò)敏。血管
通透性增加,上皮細(xì)胞脫落,分泌物呈奶油狀大量排出,有惡臭?;颊叻置谖锔?/p>
蘭氏染后可見(jiàn)性或染不定有時(shí)可染成革蘭氏陽(yáng)性的小桿菌。大小為(1.5-2.5)
μm×0.5μm,具有多形性,呈桿狀或球桿狀,分泌物PH常大小4.5,胺試驗(yàn)陽(yáng)性。
除對(duì)加德鈉菌形態(tài)學(xué)鑒別外,還可進(jìn)行菌檢查,由于細(xì)菌性貌岸然病
時(shí)酸桿菌減少,加德鈉氏菌的厭氧菌增加,可計(jì)算酸桿菌和加德鈉菌的數(shù)量變化,作
為本病診斷參考。一般取分泌物涂片,革蘭氏染,用油鏡觀察3-5個(gè)視野,計(jì)算各
種菌的數(shù)量。酸性桿菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌,(1-5)μm×1μm,常成雙,單根、鏈狀或
柵狀排列,非細(xì)菌性病酸桿菌>5個(gè)/油視野僅見(jiàn)少許加德鈉菌。細(xì)菌性病不僅
可見(jiàn)到加德鈉菌,還有其它革蘭氏陰性或陽(yáng)性桿菌,無(wú)酸桿菌或小于5個(gè)/油鏡視野。
尋找分泌物中的線索細(xì)胞,是診斷加德鈉菌性貌岸然病的重要指標(biāo)。線索細(xì)
胞為鱗狀上皮細(xì)胞粘附多數(shù)加德鈉菌所致生理鹽水涂片可見(jiàn)該細(xì)胞邊緣呈現(xiàn)鋸齒狀。
細(xì)胞已有溶解,核模糊不清,其上附著大量加德鈉菌及厭氧菌,使其表面毛糙,有斑點(diǎn)和
大量的細(xì)小顆粒,亦右用吖啶橙染法或相差顯微鏡觀察法檢查線索細(xì)胞。此外還可用培
養(yǎng)、熒光板、氣-液譜分析和PCR方法等助診。
(五)衣原體
泌尿生殖道沙眼衣原體感染是目前很常見(jiàn)的性傳播疾病之一,國(guó)外報(bào)道生殖道感染率
為10。8%,由于感染后無(wú)特異癥狀,易造成該病流行,引起子性急性炎和宮頸炎。
及原體感染的白帶膿性粘液,與細(xì)菌感染的膿性白帶不同。取膿性分泌物涂片,吉姆薩染
,有進(jìn)時(shí)可見(jiàn)到細(xì)胞內(nèi)包涵體,但陽(yáng)性率很低。過(guò)去采用傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)分離衣原體的
方法,技術(shù)難度大,特異性敏感性均不理想,且費(fèi)時(shí)費(fèi)錢。目前應(yīng)用較多的是熒光標(biāo)記的
單克隆抗體的直接熒光抗體法,可快速確定系何種血清型衣原體敏感。80年代發(fā)民展的
DNA探針技術(shù),可將分泌物經(jīng)PBS稀解,離心后沉淀物經(jīng)蛋白求恩酶K水解,酚/
氯仿抽提等處理后與沙眼衣原體探針,如外膜蛋白基因的高度保守序列,或TE-55DNA探
針等進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,可檢出沙眼衣原體的15個(gè)血清型,而與其它細(xì)菌,病毒、立克次體
等無(wú)交叉反應(yīng),敏感性和特異性均為95%左右。DNA探針?lè)椒▽?duì)泌尿生殖道衣原體疾病
的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和無(wú)癥狀衣原體攜帶者的診斷很有意義。
(六)病毒
在人類性傳播疾病中有相當(dāng)一部分是由病毒引起的??蓮姆置谖镏袡z測(cè)的病毒有:
1.單純皰疹病毒(herpessimplexvirus,HSV)有二個(gè)血清型,HSV-I和HSV-Ⅱ型。引
起的生殖道感染的以Ⅱ型為主,約占85%。表南為生殖器官皰疹,潰瘍并通過(guò)胎盤引起胎
兒感染,發(fā)生死胎、流主和畸形。實(shí)驗(yàn)診斷多取病損處分泌物涂片進(jìn)生細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、病毒
培養(yǎng)或熒光抗體檢測(cè)。在孕期感染的監(jiān)測(cè)中,可采取宮頸部位分泌物做包涵體檢查。單純
皰疹病毒以侵犯軍團(tuán)頸鱗狀上皮多見(jiàn)。感染早期細(xì)胞輕度或中度增大,核呈嗜堿性不透明
的勻質(zhì)狀毛玻璃樣外觀,偶伴有核空泡化。由于核的增殖與胞質(zhì)腫大而形成多核或巨大細(xì)
胞。感染晚期可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)有嗜伊紅包涵體,周圍有透明暈,由于分泌物檢查陽(yáng)性
率低,病毒培養(yǎng)操作復(fù)雜費(fèi)時(shí),近年來(lái)對(duì)HSV的檢查主要采用熒光抗體檢查或分子生物
方法診斷,特別是利用HSV基因組異性強(qiáng)的DNA片段棗HSV-I和HSV-Ⅱ,胸腺激
酶的寡核苷酸探針和RNA探針進(jìn)行分子雜交,可快速而靈敏地對(duì)HSV感染作出診斷。
2.人巨細(xì)胞病毒(humancytmegalovirus,HCMV)是先天感染的主要病原。一次感染
后終年潛伏于體內(nèi),在機(jī)體免疫力低下時(shí)病毒激活,可表現(xiàn)為巨細(xì)胞包涵體病。孕期胎兒
中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到侵犯可致小頭畸形、智力低下、視聽(tīng)障礙等后遺癥。故孕婦分泌物
巨細(xì)胞病毒檢查對(duì)孕期監(jiān)測(cè)尤其是重要的,常用宮頸拭子采取分泌物送檢。HCMV實(shí)驗(yàn)室
診斷方法除傳播病毒離法外,光鏡檢測(cè)包涵體陽(yáng)性就緒極低,電鏡可直直接見(jiàn)到典型的皰
疹病毒類形態(tài)結(jié)構(gòu),但無(wú)特異性,目前可采用CC-ABC法,即將標(biāo)本接種于人胚肺成纖維
細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞,使病毒在敏感細(xì)胞中增殖,培養(yǎng)2天后收獲,再用針對(duì)HCMV早期抗原
的單克隆抗體,利用生物素親和素放大作用染鑒定。亦可用HCMV、DNA片段或RNA
探針與樣品進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,夾心雜交或PCR后勤部的分子雜交來(lái)檢測(cè),臨床最常用的方
法是用ELISA法檢測(cè)孕婦血清HCMV-IGM來(lái)診斷活動(dòng)性感染。
3.人頭狀病毒(humanpapillomavirus,HPV)HPV目前鑒別有50余型。引起婦性生
殖道感染的有23型,其中最主要的有6,11,16,18,31,33,型。HPV感染細(xì)胞后細(xì)
胞的作用的主要表現(xiàn)為:①增殖感染,即病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,產(chǎn)生感染子代致使細(xì)胞
死亡。②細(xì)胞轉(zhuǎn)化,引起腫瘤發(fā)生,主要是引起生殖道鱗狀上皮肉瘤樣變,如16,18,31,
33,35,29,型,尤其是宮頸癌患者以檢查出16,18型為多見(jiàn)。HPV檢測(cè)亦可采用傳統(tǒng)
的病毒培養(yǎng)、分泌物涂片、光鏡檢測(cè)。HE染可見(jiàn)核周空暈?!皻馇驑印辈《靖腥究张菁?xì)
胞,但陽(yáng)性率很低。下生殖道疣狀贅生物者常可進(jìn)行病理學(xué)鏡可電鏡檢查,可崢到典型的
病毒感染細(xì)胞或閏毒顆粒。目前常采用ABC法以兔抗HPV為一抗,生物素標(biāo)記的羊抗兔
IGG為二抗檢測(cè)病毒抗原?;虿捎貌《鞠鄳?yīng)的寡核苷酸探針,與分泌物中提取的DNA
進(jìn)行斑點(diǎn)雜交或夾心雜交進(jìn)行檢測(cè)。如采用PCR技術(shù)則可檢測(cè)極微量的HPV(即106個(gè)
細(xì)胞中有一個(gè)感染細(xì)胞)
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