學(xué)報(bào)

JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2010，41（6）：555－557555

金銀花中木犀草苷含量測(cè)定方法的耐用性考察

張強(qiáng)

，

馮文軍

，

李曉冬

（

哈藥集團(tuán)中藥二廠質(zhì)量檢驗(yàn)中心

，

哈爾濱

150078）

摘要按照中國(guó)藥典方法

，

利用反相高效液相譜法

，

對(duì)分離條件的耐用性進(jìn)行了研究

。

在不同的譜條件下

，

研

*

PackODS-A

譜柱

，0.5%

冰醋酸溶究了金銀花中木犀草苷含量測(cè)定的譜分離情況

，

結(jié)果當(dāng)采用

YMC-

乙腈為流動(dòng)相

A，

液為流動(dòng)相

B

進(jìn)行梯度洗脫

，

檢測(cè)波長(zhǎng)為

350nm，

流速為

1mL/min，

柱溫為

40℃

時(shí)

，

分離效果較好

，

精密度和重復(fù)性良好

，

能達(dá)到中國(guó)藥典相關(guān)要求

。

關(guān)鍵詞木犀草苷

；

含量測(cè)定

；

譜分離條件

；

耐用性實(shí)驗(yàn)

R917

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A

文章編號(hào)

1000－5048（2010）06－0555－03

中圖分類(lèi)號(hào)

Robustnesstestondeterminationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae

ZHANGQiang*，F(xiàn)ENGWen-jun，LIXiao-dong

HarbinPharmGroupCo.，Ltd．，SecondChineseMedicineFactory，Harbin150078，China

AbstractInaccordancewiththeChinesePharmacopoeia，chromatographicseparationconditiwerestudiedto

determineluteolin-7-O-glucosis

showedthatwhenaYMC-PackODS-Acolumnwasadoptedwiththegradientelutionusingthemobilephaseoface-

tonitrileasmobilephaseA，0.5%aceticacidsolutionasmobilephaseB，thedetectionwavelengthwas350nm，the

flowratewas1mL/min，andthecolumntemperaturewas40°C，thebetterseparation，precisionandrepeatability

dmeettherelevantrequirementsoftheChinesePharmacopoeia;andthechromatographicsep-

arationconditicouldbeusedastheconditiforthedeterminationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae.

Keywordsluteolin-7-O-glucoside;determination;chromatographicseparationconditi;robustnesstest

PackODS-A（150mm×4.6mm，

譜柱

：（1）YMC-

5

μ

m）；（2）YMC-PackODS-A（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（3）AgilentTC-C

18

（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（4）PhenomenexC

18

（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（5）Kromasil100-5C

18

（250mm×4.6mm）；

（6）WatersC

18

（250mm×4.6mm，5

μ

m）。

木犀草苷對(duì)照品

（

供含量測(cè)定用

，

中國(guó)藥品生

物制品檢定所

）；

金銀花原藥材

（

山東三精制藥有

限公司

）；

乙腈

（

譜純

，

北京迪馬科技有限公司

）；

冰醋酸

（

譜純

，

天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所

）；

水

為二次蒸餾水

。

2

2.1

2.1.1

方法與結(jié)果

方法［1］

金銀花是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材

，

有較強(qiáng)的殺菌消

炎

、

解熱鎮(zhèn)痛的功效

。

金銀花屬于忍冬科

，

按照

《

中華人民共和國(guó)藥典

》（2005

版

）

規(guī)定

，

金銀花中

的代表性成分是綠原酸和木犀草苷

，

是否含有木犀

忍冬藤的草苷是區(qū)別正品金銀花和同科的山銀花

、

主要化學(xué)指標(biāo)

，

也是正品金銀花與山銀花等同科植

物在療效上有差異的主要原因

。

但是按照藥典方

往往分離效果不好

，

嚴(yán)法檢測(cè)木犀草苷的含量時(shí)

，

為快速

、

準(zhǔn)確地測(cè)重影響了其含量測(cè)定的準(zhǔn)確性

，

定金銀花中木犀草苷的含量

，

確保藥物的療效

，

本

課題對(duì)金銀花中木犀草苷的反相高效液相譜分

離條件的耐用性進(jìn)行了研究

。

1材料

20AT

高效液相譜儀及附件

。

日本島津

LC-

譜條件譜柱

：

以十八烷基硅烷鍵合

*06-12

收稿日期

2010-*通訊作者

Tel：E-mail：zhangqiangmarry@

556學(xué)報(bào)

JournalofChinaPharmaceuticalUniversity

第

41

卷

硅膠為填充劑

；

流動(dòng)相

：

以乙腈為流動(dòng)相

A，

以

0.5%

冰醋酸溶液為流動(dòng)相

B，0～

進(jìn)行梯度洗脫

，

30min，

流動(dòng)相

A

由

10%

→

30%；

檢測(cè)波長(zhǎng)

：

350nm；

進(jìn)樣量

：10

μ

L；

理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)

算不低于

2000。

2.1.2

對(duì)照品溶液的制備

即得

。

溶液

，

2.1.3

供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取木犀草苷

對(duì)照品適量

，

以

70%

乙醇制成每

1mL

含

40

μ

g

的

取金銀花細(xì)粉

（

過(guò)四

號(hào)篩

）

約

3g，

精密稱(chēng)定

，

置具塞錐形瓶中

，

精密加入

70%

乙醇

50mL，

稱(chēng)定重量

，

超聲處理

（

功率

250W，

頻率

35kHz）1h，

放冷

，

再稱(chēng)定重量

，

用

70%

乙醇補(bǔ)

足減失的重量

，

搖勻

，

濾過(guò)

，

取續(xù)濾液

，

即得

。

2.2

2.2.1

譜分離條件的優(yōu)化

不同流速的比較使用譜柱

（1）

按照中

1.0，

國(guó)藥典方法

，

柱溫

30℃，

比較了不同流速

（0.8，

1.2mL/min）

木犀草苷的分離情況

。

結(jié)果上述各流

速木犀草苷的分離情況都較差

，

譜圖見(jiàn)圖

1。

Figure1Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosideatdifferentflowrate

A：0.8mL/min；B：1.0mL/min；C：1.2mL/min

2.2.2

流動(dòng)相不同梯度變化的比較使用譜柱

（1）

按照中國(guó)藥典方法

，

柱溫

30℃，

流速

1mL/min，

比較了流動(dòng)相不同梯度變化木犀草苷的分離情況

：

A

由

10%

→

30%；

第第

1

種梯度變化

0～30min，

2

種梯度變化

0～40min，A

由

10%

→

30%；

第

3

種

A

由

10%

→

30%，梯度變化

0～50min，

結(jié)果上述

各流動(dòng)相梯度木犀草苷的分離情況都較差

，

譜圖

見(jiàn)圖

2。

Figure2Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferentmobilephasegradient

A：Gradient1；B：Gradient2；C：Gradient3

2.2.3

不同柱溫的比較使用譜柱

（1）

按照中國(guó)

流速

1mL/min，

比較了不同柱溫條件典方法

，

30，35℃

木犀草苷的木犀草苷的分離情況

，

結(jié)果

25，

分離情況都較差

，

且柱溫

25℃

時(shí)木犀草苷主峰和相

鄰雜質(zhì)峰合為一個(gè)峰

，

只有柱溫

40℃

能得到較好的

分離

，

且能達(dá)到藥典相關(guān)要求

，

譜圖見(jiàn)圖

3。

2.2.4

不同廠家譜柱的比較按照中國(guó)藥典方

比較了不同廠家譜柱木犀草苷的分離情況

，

柱法

，

（2）、（3）、（4）

流速

1mL/min，

溫

40℃，

譜柱

（1）、

（6）

流速

0.8mL/min，（5）、

結(jié)果譜柱

（1）

和譜

柱

（2）

均能得到較好的分離

，

且都能達(dá)到中國(guó)藥典

（4）、（5）、（6）

分離效果都相關(guān)要求

。

譜柱

（3）、

（6）

木犀草苷主峰和相鄰雜較差

，

而且譜柱

（5）、

質(zhì)峰合為一個(gè)峰

，

譜圖見(jiàn)圖

4。

2.3

精密度和重復(fù)性

PackODS-A（150mm×4.6mm）

采用

YMC-

第

6

期張強(qiáng)等

：

金銀花中木犀草苷含量測(cè)定方法的耐用性考察

557

Figure3Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferentcolumntemperature

A：25℃；B：30℃；C：35℃；D：40℃

Figure4Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferenttypeofcolumn

A：Column（1）；B：Column（2）；C：Column（3）；D：Column（4）；E：Column（5）；F：Column（6）

譜柱

，

流速

1mL/min，

柱溫

40℃

作為譜條件按

照中國(guó)藥典方法進(jìn)行精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

。

2.3.1

取同一供試品溶液

，

在上述譜

條件下重復(fù)進(jìn)樣

6

次

，

測(cè)定峰面積值

，

計(jì)算儀器精

精密度

6

次進(jìn)樣的

RSD

為

0.05%，

密度

，

表明本方法的精

密度良好

。

2.3.2

重復(fù)性取同一批號(hào)樣品

，

制備

6

份供試

品溶液

，

在上述譜條件下

，

分別精密吸取

10

μ

L，

3討論

PackODS-A

按照中國(guó)藥典方法

，

采用

YMC-

譜柱

，

流速

1mL/min，

柱溫

40℃

作為金銀花中木

犀草苷含量測(cè)定的譜條件

，

分離效果較好

，

精密

度和重復(fù)性良好

，

能達(dá)到中國(guó)藥典相關(guān)要求

，

可作

為中國(guó)藥典金銀花中木犀草苷含量測(cè)定的譜

條件

。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在很多譜條件下木犀草苷和相

鄰雜質(zhì)峰分離不好

，

而且在有些譜條件下木犀草

苷和相鄰雜質(zhì)峰合為一個(gè)峰

，

極易導(dǎo)致木犀草苷含

量測(cè)定結(jié)果偏大

。

不同廠家的譜柱對(duì)物質(zhì)的分離效果不一樣

，

在實(shí)驗(yàn)和工作中要選擇合適的譜柱

，

另外柱溫對(duì)

物質(zhì)的分離效果的影響也不容忽視

。

參考文獻(xiàn)

［1］

國(guó)家藥典委員會(huì)

.

中華人民共和國(guó)藥典

：

一部

［M］.

北京

：

化

2005：153.

學(xué)工業(yè)出版社

，

注入液相譜儀

，

測(cè)定峰面積值

，

計(jì)算方法精密度

，

6

份供試品檢測(cè)結(jié)果的

RSD

為

0.4%，

表明本方法

的重復(fù)性良好

。

2.4

不同批次金銀花木犀草苷含量測(cè)定結(jié)果

取

5

批不同批號(hào)金銀花樣品

，

分別制備供試品

溶液

，

在

“2.3”

所述譜條件下

，

分別精密吸取

10

μ

L，

注入液相譜儀

，

測(cè)定木犀草苷的含量

，

結(jié)

果見(jiàn)表

1。

Table1Determinationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae（n=2）

No.

080302

080701

090601

090902

090903

Averagecontent/%

0.068

0.085

0.063

0.098

0.052

RSD/%

0.1

0.1

0.3

0.2

0.0