DNA倍體分析在食管良惡性疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后研究中的應(yīng)用
-
第27卷第6期
2010年12月
阿¨社方學(xué)院學(xué)杯(醫(yī)學(xué)版)
orthUJournal
ofHebeiNniversity(Medical
Edition)
VoL27No.6
Dee.2010
DNA倍體分析在食管良惡性疾病轉(zhuǎn)歸
及預(yù)后研究中的應(yīng)用
逯海綜述孫劍經(jīng)審校
(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院消化科,河北張家口075000)
【摘要1DNA非整倍體的出現(xiàn)是惡性腫瘤的特征性標(biāo)志之一。食管上皮細(xì)胞的不典型增生中。DNA異倍體
的出現(xiàn)是惡變的早期信號。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測癌細(xì)胞生物學(xué)特性,是從分子生物學(xué)水平探索腫瘤生物學(xué)特
性及其發(fā)展規(guī)律。測量和分析細(xì)胞核I)NA含量與倍體對惡性腫瘤的病理診斷、惡性程度判定、療效估價、預(yù)
測預(yù)后具有重要價值。本文主要綜述了腫瘤細(xì)胞DNA倍體分析及其臨床應(yīng)用的現(xiàn)狀,希望對其應(yīng)用于臨床
以提高對食道良惡性疾病診斷的準(zhǔn)確性和預(yù)測食道癌前病變的發(fā)展轉(zhuǎn)歸起到積極的作用。
【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù);DNA倍體分析;食管腫瘤;遺傳異質(zhì)性;預(yù)后
【中圖分類號1R571【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】Cdoi:10.3969/j.issn.1673—1484.2010.06.043
App¨cati∞ofDNA
PloidyAnalysis
inalignantPI嘈I如豳of&ni緲andMDiseaseofEs叩h姆昀I
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Jian-jing
ffiliated
Hospital,HebeiNTheFirst
A
orthUniversity,Zhan西iakou,075000,HebeiChina
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DNA
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malignant
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ofesophagealsquamousepithelial
cell.Dbeanearlysign
ofn'la-
change.Adoptionof
flowingcytometricintraoperation
for
detectingbiologicalcharacteristicsofcancer
cellsisthe
investigation
oftumor
biologieal
characteristicsandthe
lawof
development。from
thelevel
of
Iecular
biology.The
measurementand
analysison
rno—
thenucleusDNAcontentand
heteropid
infleuenceonpatho—
logicdiagnosis,malignantdegreejudgement,curativeeffectassessment。and
predictiveprognosis
for
malig-
nanttumorareof
im
orcellDNAanalysisandclinicalapplication
of
heteropid
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and
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cancer
malignantdiseasediagnosisaccurately
forecastthe
development
of
esophageal
intramucosal
preeclampsia.
neoplasms,Geneticheterogeneity。
[KEYwomrsl
Prognosis
Flow
cytometry,DNAploidyanalysis。Esophageal
食道疾病在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其中
食道惡性腫瘤所占比例也逐年增加,食道癌已成為臨
床最常見的惡性腫瘤之一。目前在早期食道癌診斷方
面仍缺乏特異而敏感的檢測手段。很多患者在癌前病
變時期和食道癌早期由于臨床癥狀不明顯,未能及時
就診,加上傳統(tǒng)檢查方法的局限性,以至于在發(fā)現(xiàn)惡變
時已處于中晚期,從而延誤治療。目前迫切需要簡便、
可靠的臨床檢查法,以便能及早發(fā)現(xiàn)病變,并有效地鑒
別其良、惡性。流式細(xì)胞儀(FCM)是檢測DNA倍體
狀況的敏感儀器,隨著FCM在臨床的普及,DNA倍
體分析在腫瘤學(xué)及其他疾病的診斷和預(yù)后判斷中已獲
基金項(xiàng)目:河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號:072761678)
74
得廣泛應(yīng)用[1-z]。測量和分析細(xì)胞核DNA含量與倍
體對食道癌的病理診斷、惡性程度判定、療效估價、預(yù)
測預(yù)后具有重要價值。
1基本概念及原理
1.1流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry,
FCM)是利用流式細(xì)胞儀對生物顆粒性物質(zhì)和細(xì)胞的
物理和/或化學(xué)特征性行分析,并對特定的細(xì)胞加以
分選的多參數(shù)計(jì)量技術(shù)口]。通過激光照射快速自動掃
描熒光染的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本,顯示被測細(xì)胞的DNA含
量與細(xì)胞周期,借以揭示腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)。用
以分析細(xì)胞大小、細(xì)胞周期、DNA含量、細(xì)胞表面分子
2010年12月逯海等:DNA倍體分析在食管良惡性疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后研究中的應(yīng)用第6期
以及進(jìn)行細(xì)胞分選等。目前,用流式細(xì)胞術(shù)對惡性腫
瘤組織生物學(xué)特性的研究已形成一個新的高潮。獲得
了大量有重要學(xué)術(shù)價值的資料,且已廣泛應(yīng)用于腫瘤
臨床‘}6|。
1.2DNA含量測定正常細(xì)胞有較恒定的DNA含
量,而細(xì)胞癌變過程中結(jié)構(gòu)和/或染體異常是很常見
的。這種變化在流式細(xì)胞儀分析中以DNA倍體指數(shù)
的形式表現(xiàn)出來[7]。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞都涉及
遺傳物質(zhì)DNA的改變,DNA鏈上基因的排列順序決
定著細(xì)胞的生物學(xué)特,當(dāng)受到致癌因素刺激時DNA
受到損傷,導(dǎo)致細(xì)胞基因突變與染體畸形或斷裂,使
細(xì)胞在分裂增殖過程中出現(xiàn)DNA含量的丟失、擴(kuò)增
或染體移位、不分離等導(dǎo)致細(xì)胞DNA的質(zhì)和量的
異常,基因排列順序發(fā)生改變,成為DNA含量異常
(增多或減少)的腫瘤細(xì)胞,即DNA非整倍體細(xì)胞,因
此測量和分析細(xì)胞DNA含量與倍體對惡性腫瘤的診
斷具有重要價值。
2常用術(shù)語及檢測指標(biāo)
2.1常用術(shù)語①DNA指數(shù)(DNAindex,DI):根據(jù)
1984年國際分析細(xì)胞學(xué)會名詞審定委員會及1990年
第14屆國際分析細(xì)胞學(xué)學(xué)術(shù)會議的決定,以正常組織
內(nèi)二倍體細(xì)胞做內(nèi)標(biāo),確定樣本細(xì)胞的DI值。②
DNA倍體(DNA
ploidy)分為二倍體(diploidy,D)、近
二倍體(near-diploidy,ND)、四倍體(teteroploidy,T)、
非整倍體(aneuploidy,AN)及多倍體(multiploidy,M)
等5種。樣本細(xì)胞中出現(xiàn)后4種倍體類型之一者,統(tǒng)
稱為DNA異倍體(heteroploidy,H)。③細(xì)胞程序性
死亡水平(apoptosis,Apo):在DNA直方圖上,在二倍
體G0,。期細(xì)胞峰前出現(xiàn)一個亞二倍體DNA含量的細(xì)
胞峰為程序性死亡細(xì)胞峰。④細(xì)胞增殖活性:即S期
細(xì)胞比率(S-phasefrae-tion,SPF),SPF(%)=Is÷
(Go/1+S+G2M)]X100o%C8|。
2.2對樣本進(jìn)行DNA含量分析的主要檢測指標(biāo)及
意義細(xì)胞凋亡水平(apoptosis,Apo);細(xì)胞增殖周期
分析如S期細(xì)胞比率(S-phasefraction,SPF)、DNA
的(Go/G1)%、(G2+M)%等。Okuyama等認(rèn)為對腫瘤
細(xì)胞DNA含量的檢測,不僅能反映腫瘤細(xì)胞DNA含
量的變化情況,還可以反映細(xì)胞凋亡水平及增殖活性一
即細(xì)胞動力學(xué)變化情況。Ngoi等認(rèn)為,惡性腫瘤的重
要生物學(xué)特性之一是無限制生長,惡性腫瘤細(xì)胞無限制
生長,則SPF明顯增高。Bektas等分析了正常食管黏
膜、增生上皮細(xì)胞和不典型增生細(xì)胞的DNA含量后認(rèn)
為,DNA異倍體可能是癌前病變向食管癌轉(zhuǎn)變的重要
標(biāo)志[1]。Kerr等證實(shí)Apo的變化不僅在腫瘤的發(fā)生、
發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移中有重要意義,而且對腫瘤的診斷、治
療、惡性程度及預(yù)后判斷也有一定的實(shí)用價值[1]。
3食道良性疾病向食道癌轉(zhuǎn)化的機(jī)制
3.1食管疾病的發(fā)展轉(zhuǎn)化食管良性疾病主要包括
食管炎、胃食管反流病、食管憩室、食管裂孔疝等。其
中反流性食管炎、胃食管反流病的反復(fù)發(fā)作是引起
Barrett食管的主要原因。而Barrett食管是食管腺癌
的癌前病變,是食管良性疾病向惡性轉(zhuǎn)化的過渡階段。
大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為食道癌發(fā)生發(fā)展過程可概括為食道
炎——腸上皮化生(Barrett食管)——異型增生.(上皮
內(nèi)瘤變)一原位癌一浸潤性癌的病理過程.是一個多階
段循序漸進(jìn)的過程,與Barrett食管、食管鱗狀上皮化
生和不典型增生、幽門螺桿菌、胃食管反流性疾病等因
素密切相關(guān)。
3.2食道癌的分子生物學(xué)機(jī)制環(huán)境、飲食和遺傳等
多因素引起食管癌的發(fā)生,其涉及的分子生物學(xué)基礎(chǔ)
目前認(rèn)為是癌基因激活或抑癌基因失活的基因變化所
致,其發(fā)生發(fā)展過程涉及多種等位基因的獲得或缺失,
抑癌基因甲基化以及許多基因和蛋白表達(dá)的改變。研
究已證實(shí)的有Rb、P。。等抑癌基因失活,以及環(huán)境等多
因素使原癌基因H-ras、C-myc和hsl-1等激活有關(guān)。
食道癌形成與發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制可能與G-S期
調(diào)控因子失常有關(guān),具體可能是cyclin
D,上調(diào),Pss、
Rb失活。使細(xì)胞停止DNA損傷修復(fù),并且不能進(jìn)入
凋亡,加速細(xì)胞周期的進(jìn)行,使細(xì)胞異常擴(kuò)增導(dǎo)致腫瘤
發(fā)生發(fā)展。cyclinD。、P。。和Rb蛋白的檢測對食道癌
預(yù)后、復(fù)發(fā)的估計(jì)有重要參考價值,并為食管癌的診斷
和治療提供分子生物學(xué)依據(jù)。
3.3Barrett食管的病因Barrett食管是長期胃酸
暴露和胃液返流的并發(fā)癥。反流性食管炎患者中約
10%"--20%發(fā)生Barrett食管[2]。眾多研究表明,Bar-
rett食管是食管不典型增生和腺癌發(fā)生最鶯要的危險
因素。Cosentino等[9]研究證實(shí)Barrett食管患者患食
管腺癌的危險性是正常人的30~60倍,Clark等[10j研
究發(fā)現(xiàn).79%的食管腺癌伴有特殊腸上皮化生,42%伴
有食管一胃結(jié)合部腺癌,5%伴有賁門下腺癌。Camer-
on等[11]發(fā)現(xiàn)食管腺癌中Barrett食管的發(fā)生率為
100%,EGJ腺癌為42%。其他研究者認(rèn)為Barrett食
管患者腺癌發(fā)生率為0.23%"--0.8%[1z-14]。
4在食道癌早期診斷中的應(yīng)用
食道癌的早期診斷具有重要意義。傳統(tǒng)檢查手段
對食道癌的早期診斷陽性率較低,即使在病理形態(tài)上
對可疑癌變的病例作出確診也十分困難.DNA異倍體
細(xì)胞的出現(xiàn)顯示了一個由量變到質(zhì)變的過程.說明
了已發(fā)生癌變或具有癌變的可能性。檢測食道黏膜癌
前病變和食道癌細(xì)胞核內(nèi)DNA含量,對分析癌前病
75‘
2010年12月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)第6期
變發(fā)展趨勢,發(fā)現(xiàn)早期食管癌有一定價值[7]。DNA倍
體與腫瘤的分化、生長方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密
切相關(guān),且惡性程度高的腫瘤DNA非整倍體檢出率
高【l5I。DNA異倍體出現(xiàn)率越高,癌變的發(fā)生率也越
高,具有異倍體的消化道潰瘍病有癌一樣的侵襲生物
學(xué)特性[16I。
5食管癌DNA倍體的異質(zhì)性研究
人們在利用流體細(xì)胞術(shù)(FCM)對腫瘤細(xì)胞的DNA
DNA倍體值常常存在一定的差異,即整倍體與非整倍
。因此將這種同一組織類型的不同病例或同一腫瘤
的不同組織區(qū)域之間DNA倍體的差異,稱為DNA倍
(PH)[17l。肺癌、腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、腎細(xì)
DNA倍體異質(zhì)性的現(xiàn)
L8]。PH現(xiàn)象發(fā)生的機(jī)制可能是:由于腫瘤的多中
PH發(fā)現(xiàn)PH腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率要
PH腫瘤.PH現(xiàn)象反映腫瘤的惡性度LlJ。
DNA倍體與食管癌預(yù)后的關(guān)系
早期食道癌及時根治預(yù)后良好.手術(shù)切除5年生
>90%。癥狀出現(xiàn)后未經(jīng)治療的食管癌患者一般
m、已侵犯食管肌層、癌細(xì)胞分化程度差及有局部淋
年制定的食管癌病理分期標(biāo)準(zhǔn),是確定治療方案
DNA異質(zhì)
NA倍體分析在診斷早期腫瘤中具有明顯優(yōu)越性,所
DNA倍體分析作為生物學(xué)指標(biāo)用于食道癌
Wang。18]等分析了117例食
DNA含量
SPF、淋巴結(jié)和血道轉(zhuǎn)移程度遠(yuǎn)較一些生物標(biāo)
(如PCNA、EGFR、m3等)有臨床意義。DNA倍
1
Kazutoshi等對57例食管鱗狀細(xì)胞癌患者的
44%發(fā)生PH現(xiàn)象.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較
PH現(xiàn)象發(fā)生率高,預(yù)后差,提示PH
76
與其預(yù)后相關(guān)[1]。多因素分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小、淋巴結(jié)
轉(zhuǎn)移、直接浸潤深度和DNA倍體分析是有顯著意義
的影響預(yù)后因素[19|。重度不典型增生的細(xì)胞增殖活
性明顯高于其他癌前病變.對于形態(tài)學(xué)上診斷為癌前
病變的病例,特別是不典型增生,有必要進(jìn)行DNA含
量、倍體和細(xì)胞增殖活性的多參數(shù)測定,對出現(xiàn)DNA
含量異常、DNA異倍體及細(xì)胞增殖指數(shù)升高的病人,
應(yīng)密切隨訪,以便及時發(fā)現(xiàn)早期癌變,有助于食道癌的
早期診斷和早期治療L20]。
綜上所述,食道癌已成為嚴(yán)重威脅人類生命健康
的惡性疾病。其早期癥狀不明顯,早期診斷率較低,許
多患者確診時已發(fā)展到中晚期,生存率低,預(yù)后不良。
食道癌多由食道良性疾病發(fā)展而來,其發(fā)生發(fā)展是個
漸進(jìn)的過程,對食道良性疾病及癌前病變的早期診斷
和治療是預(yù)防、控制食道癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。傳統(tǒng)檢
查方法對這些疾病的早期診斷存在一定局限性。流式
細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的DNA含量具有很高的靈敏度,在
形態(tài)學(xué)觀察還不能作出明確診斷之前,就可以作出確
切診斷。采用脫落細(xì)胞學(xué)與流式DNA倍體相結(jié)合的
辦法進(jìn)行診斷,陽性率高于單純的細(xì)胞學(xué)檢查。這對
于臨床中減少漏診有重要的參考價值,有望成為鑒別、
診斷、普查惡性腫瘤的有效方法。通過對DNA含量
和倍體的定量分析,發(fā)現(xiàn)DNA倍體與腫瘤的分化、生
長方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密切相關(guān),DNA異倍
體可能是癌前病變向食管癌轉(zhuǎn)變的重要標(biāo)志.測量和
分析細(xì)胞核DNA含量與倍體對食道癌的病理診斷、
惡性程度判定、療效估價、預(yù)測預(yù)后具有重要價值。希
望對其應(yīng)用于l隘床以提高對食道良惡性疾病診斷的準(zhǔn)
確性和預(yù)測食道癌前病變的發(fā)展轉(zhuǎn)歸起到積極的作用。
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倍體進(jìn)行檢測時發(fā)現(xiàn),在同一腫瘤的不同部位取材所測
體共存的現(xiàn)象,同一瘤體的瘤細(xì)胞具有不同性質(zhì)的細(xì)胞
體異質(zhì)性
胞癌等多種惡性腫瘤都存在
象
心發(fā)生,隨著腫瘤的生長,多個起源細(xì)胞克隆相互碰撞
形成包括多個不同倍體類型的腫瘤細(xì)胞亞在內(nèi)的單
個腫塊,并可能由于基因突變造成起源克隆的遺傳不
穩(wěn)定,從而導(dǎo)致腫瘤在其演進(jìn)過程中失去單克隆而獲
得異質(zhì)性遺傳物質(zhì),結(jié)果瘤體內(nèi)出現(xiàn)了浸潤性更強(qiáng)、轉(zhuǎn)
移性更強(qiáng)的新的腫瘤細(xì)胞克隆體,因而就會產(chǎn)生對藥
物治療的抵抗性,
高于非
6
存率
在一年內(nèi)死亡。食管癌位于食管上段、病變長度超過
5c
巴結(jié)或器官轉(zhuǎn)移者,預(yù)后不良。目前,我們?nèi)圆捎?/p>
1976
和預(yù)后評估的主要依據(jù)。然而腫瘤細(xì)胞的
性使病理分期標(biāo)準(zhǔn)顯得相對不靈活,而且傳統(tǒng)檢查手
段對食道癌的早期診斷陽性率較低,即使在病理形態(tài)
上對可疑癌變的病例作出確診也十分困難。又由于
D
以目前把
的預(yù)后判斷已成為熱點(diǎn)。
管鱗狀細(xì)胞癌患者的多種預(yù)后因素.指出
的測定、
記物
體異質(zhì)性現(xiàn)象也是提示食管鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后不良的
個指標(biāo).
研究發(fā)現(xiàn).有
無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者
第27卷第6期阿¨弘方學(xué)阮學(xué)亦(醫(yī)學(xué)版)V01.27No.6
2010年12月
Journal0fHebeiNorth
University(Medical
Edition)Dec.2010
中藥多糖的藥理研究進(jìn)展
賀百花吳玉紅
(湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院.湖南衡陽421001)
【關(guān)鍵詞】中草藥;多糖類;藥理作用
【中圍分類號1R961.I【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】Cdol:10.3969/j.issn.1673--1484.2010.06.044
中藥多糖是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而現(xiàn)補(bǔ)骨脂多糖可作用于IL-2和IFN-y,IL-2能促進(jìn)T
成的天然高分子多聚物,是中藥主要活性成分之一。淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率,增加T細(xì)胞、B細(xì)胞對IL-
多糖是所有生命有機(jī)體的重要組成部分,在生物體內(nèi)2的合成和分泌。補(bǔ)骨制脂多糖還可以促進(jìn)細(xì)胞分泌
不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料,而且存在于一切細(xì)IFN一7,通過IFN-7發(fā)揮廣泛的免役增強(qiáng)效果。王慧
胞膜結(jié)構(gòu)中,參與細(xì)胞各種生命現(xiàn)象的代謝活動,也是銘[4]等研究發(fā)現(xiàn),鱉甲多糖能顯著對抗免疫抑制劑引
生物體內(nèi)除核酸和蛋白質(zhì)以外的又一類重要的生物分起的小鼠免疫器官萎縮,對免疫器官具有保護(hù)作用,鱉
子。中藥多糖有很強(qiáng)的生物活性,可調(diào)控細(xì)胞分裂和
甲多糖可改善免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能。
分化,具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、降血糖、1.2對神經(jīng)系統(tǒng)的作用研究發(fā)現(xiàn),黃忠仕等研究龍
抗輻射等藥理作用。眼參多糖對快速老化小白鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織單胺類
1中藥多糖的藥理作用神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響,結(jié)果表明龍眼參多糖可有效調(diào)
1.1對免疫系統(tǒng)的作用研究表明胡蘆巴半糖配整中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的合成及提高學(xué)習(xí)記憶能力,
甘露聚糖對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性、人淋巴細(xì)具有良好的抗癡呆作用[s]。汪茜等采用改良的Longa
胞HB4C5增殖和免疫球蛋白M分泌有活化作用[1]。線栓制法制備大鼠中動脈栓塞模型,探討黃芪多糖對
現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)從PanaxquinquefoliusL.根莖中提取的缺血缺氧腦損傷大鼠腦組織中Ca2十和興奮性氨基酸
多糖具有刺激肺巨噬細(xì)胞分泌TNF-a的作用[2]。李
水平的影響,實(shí)驗(yàn)表明黃芪多糖可以降低缺血缺氧損
發(fā)勝r3]等用水提醇沉的方法提取補(bǔ)骨脂多糖,研究發(fā)傷后大鼠腦組織中Ca2+和興奮性氨基酸含量,同時也
6邵宏濤,孫麗華,谷偉。等.DNA倍體分析在惡性胸腔積液medicaland
surgicaltherapies
for
gastroesophageal
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診斷中的應(yīng)用[J-I.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)。2000。13(6):369—370.disease:follow—up
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outcomeof
1責(zé)任編輯:寰樸)
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