更好的抗體驗證方法應改善關鍵研究

蒙特利爾神經病學研究所和醫(yī)院(神經病學)的彼得·麥克弗森(Peter McPherson，PhD)領導的研究小組在eLife中發(fā)表了一項研究(“ 抗體表征程序的實施及其對主要ALS / FTD疾病基因C9ORF72的應用 ”)，該研究指出了需要更好的抗體驗證，并概述了其他實驗室可以用來確保與它們一起工作的抗體正常運行的過程。

抗體在實驗室和診所中用于研究蛋白質，蛋白質是將生物體基因信息轉化為組織，器官的結構，功能和調控的生物分子?；蛲蛔儠е碌鞍踪|失衡或功能失調，從而導致人類疾病。

抗體使科學家可以通過鑒定蛋白質在細胞中的位置和數(shù)量來研究蛋白質。由于它們的重要性，許多公司將抗體作為商業(yè)產品進行生產，他們將其出售用于科學研究和用于臨床環(huán)境。

然而，先前的研究表明，許多可商購獲得的抗體不能特異性鑒定它們應該檢測的蛋白質。這就對使用這些抗體的研究提出了質疑，并強調需要一種準確，標準的過程來測試抗體的質量。

Neuro研究人員決定使用人類蛋白質作為測試案例，以突出抗體驗證問題并演示其他實驗室可以用來驗證其抗體的程序。他們專注于基因C9ORF72的蛋白質產物，該基因突變是肌萎縮性側索硬化癥(ALS)和額顳癡呆的主要遺傳原因。

抗體是生物醫(yī)學研究的重要資源，但尚無社區(qū)公認的標準來嚴格表征其質量。在這里，我們開發(fā)了一種程序來驗證預先存在的抗體。通過蛋白質組學數(shù)據(jù)庫確定的具有高表達靶標的人類細胞系，用CRISPR / Cas9修飾以敲除(KO)相應基因。購買針對靶標的商業(yè)抗體，并通過免疫印跡比較親本和KO進行測試。研究人員寫道，經過驗證的抗體可用于最終鑒定表達水平最高的細胞系，如果需要，可產生新的KO，然后通過免疫沉淀和免疫熒光篩選細胞系。

選定的抗體用于更深入的操作，例如免疫組織化學。該管道易于實現(xiàn)且可擴展。應用于主要ALS疾病基因C9ORF72的高質量抗體揭示了C9ORF72定位于吞噬體/溶酶體。無法識別C9ORF72的抗體已被廣泛引用在論文中，引起了人們對先前報道的C9ORF72特性的關注。”

在測試了公司宣傳的針對C9ORF72的16種抗體后，研究小組發(fā)現(xiàn)16種抗體中只有一種能夠在免疫熒光中準確檢測到C9ORF72，這種技術可以使抗體對蛋白質染色，從而可以在顯微鏡下看到它們。其他技術僅用另外兩種抗體就成功了。通過驗證標準的抗體尚未在科學研究中使用。未能通過驗證標準的抗體已在多項研究中使用。

該結果使以前的研究受到質疑，這些研究使用抗體來檢測C9ORF72，這些C9ORF72要么根本不識別蛋白質，要么識別其他無關蛋白質。而且，他們強調需要更好的抗體驗證。

科學面臨可再現(xiàn)性的危機。研究結果通常是無法復制的。在細胞生物學中，缺乏有效的抗體導致了該問題。研究人員在其eLife論文中描述了他們的驗證方法，其他實驗室可以復制該驗證方法以確保其抗體正常工作。

麥克弗森說：“在研究C9ORF72論文時，它變得與一個基因無關，而與其他實驗室可用于驗證抗體的模板有關。” “我們使用的程序并不是革命性的，實際上，這使我們的方法廣泛適用于本領域的任何實驗室，但據(jù)我所知，這是描述簡化抗體驗證過程的第一批論文之一?？芍貜托晕C的很大一部分是由于抗體驗證不力。我們欠資金提供者和患者做得更好。”

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