恩諾沙星與乙酰甲喹聯(lián)用體外抗菌活性研究

蔣公建1,2，駱世軍2，雷元軍2，范建彪2，符華林3*，魏世軍4

（1.重慶市萬(wàn)州區(qū)畜牧站，重慶萬(wàn)州404100；2.重慶先鋒動(dòng)物藥業(yè)有限公司，重慶

萬(wàn)州404100；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院獸藥創(chuàng)新制劑工程技術(shù)研究中心，成都

611130；4.重慶市開州區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶開州405400）

[摘要]為考察恩諾沙星與乙酰甲喹的聯(lián)合抗菌活性，采用肉湯稀釋棋盤法測(cè)定了

恩諾沙星與乙酰甲喹單用及聯(lián)用對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌臨床菌株的體外抗菌活性。

結(jié)果顯示：恩諾沙星與乙酰甲喹單獨(dú)使用對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為8、32μg/mL，

對(duì)沙門氏菌的最小抑菌濃度為16、256μg/mL。兩藥聯(lián)用對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的

FIC指數(shù)為0.5和0.75，分別表現(xiàn)為協(xié)同作用和相加作用。試驗(yàn)表明，恩諾沙星與乙

酰甲喹聯(lián)用可以增強(qiáng)對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌感染的治療效果。

[關(guān)鍵詞]乙酰甲喹；恩諾沙星；聯(lián)合抗菌；FIC指數(shù)

StudyontheAntibacterialActivityof

EnrofloxacinCombinedwithMequindoxinvitro

JIANGGong-jian1,2,LUOShi-jun2,LEIYuan-jun2,FANJian-biao2,

FUHua-lin3*,WEIShi-jun4

(HusbandryBureauofWanzhouDistrict,Wanzhou,Chongqing404100,China;

gqing,Wanzhou,Chongqing404100,China;

tiveEngineeringResearchCenterofVeterinaryPharmaceutics,CollegeofVeterinary

Medicine,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu625014,China；

HusbandryandVeterinaryBureauofKaizhouDistrict,Kaizhou,Chongqing405400,China)

Abstract:Inordertostudyonthecombinedantibacterialactivityofenrofloxacinand

mequindox,Brothmicrodilutioncheckerboardmethodwasusedtodetecttheinvitro

作者簡(jiǎn)介：蔣公建，高級(jí)獸醫(yī)師，從事獸藥研發(fā)與推廣工作。

通訊作者：符華林。E-mail:fuhl2005@

antibacterialactivityofenrofloxacinaloneandcombinedwithmequindoxagainst

owedthatMICofenrofloxacinand

mequindoxagainstEscherichiacoliwas8μg/mLand32μg/mLwhentheywereused

alone,andMICofthemagainstSalmonellawas16μg/mLand256μg/

enrofloxacinandmequindoxwerecombined,theFICagainstEscherichiacoliand

Salmonellaisolateswas0.5and0.75respectively,whichindicatedthesynergicactionon

ultssuggestthatthecombined

useofenrofloxacinandmequindoxcanenhancethetreatmenteffectofEscherichiacoli

andSalmonellainfecti.

Keywords:mequindox;enrofloxacin;combinedantibacterialactivity;FICindex

恩諾沙星是第一個(gè)動(dòng)物專用的氟喹諾酮類抗菌藥物，1987年由德國(guó)拜耳公司投

放市場(chǎng)，我國(guó)于1993年研制成功。恩諾沙星具有殺菌活性強(qiáng)、抗菌譜廣、生物利用

度高、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，近年已廣泛用于獸醫(yī)臨床，對(duì)于防治動(dòng)物大腸桿菌、巴

氏桿菌、嗜血桿菌、霉形體感染等疾病有良好效果[1-3]。乙酰甲喹是我國(guó)首創(chuàng)的治療

豬痢疾的首選和特效藥，具有用量小、見效快、療效高等優(yōu)點(diǎn)，其抗菌機(jī)理可能與

抑制菌體DNA合成有關(guān)。除主治豬痢疾外，乙酰甲喹也是治療禽、仔豬黃痢和

白痢、犢牛傷寒等疾病及多種畜禽消化道感染的主要藥物[4-5]。

隨著養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；?、集約化發(fā)展，抗菌藥物的大量使用、不合理應(yīng)用和濫用造

成臨床產(chǎn)生了大量的耐藥菌株，給臨床感染性疾病的防治造成一定的困難。因此，

尋求新的聯(lián)合用藥技術(shù)是目前獸醫(yī)臨床研究的熱點(diǎn)。恩諾沙星和乙酰甲喹均是對(duì)消

化道感染性疾病具有較好療效的抗菌藥物，但由于廣泛使用，近年來(lái)耐藥菌株也不

斷出現(xiàn)。為了提高臨床抗菌效果，近年來(lái)有人將恩諾沙星和乙酰甲喹聯(lián)合用于臨床，

王傲雪報(bào)道了乙酰甲喹與諾氟沙星、恩諾沙星等藥聯(lián)用抗雞源沙門氏菌，但并未表

現(xiàn)協(xié)同作用[7]。目前養(yǎng)豬業(yè)中將恩諾沙星與痢菌凈聯(lián)用治療大腸桿菌和沙門氏菌感

染也較多，但未見二者對(duì)豬場(chǎng)臨床菌株聯(lián)合藥敏試驗(yàn)的報(bào)道。本研究采用兩倍稀釋

法和棋盤法測(cè)定乙酰甲喹和恩諾沙星單用及聯(lián)用對(duì)豬源大腸桿菌和沙門氏菌臨床株

的體外抑菌活性，以期篩選出能明顯增強(qiáng)對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌抗菌活性的復(fù)方制

劑，為臨床乙酰甲喹與恩諾沙星合理配伍提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1藥品與試劑乙酰甲喹，含量99%，山西兆益生物有限公司，批號(hào)20130314；

恩諾沙星，含量99.5%，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)20120321。M-H液體培養(yǎng)基、

M-H瓊脂購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。

1.2試驗(yàn)菌株大腸桿菌、沙門氏菌，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)研究室提供，

系臨床分離致病菌,2014年6月分離于四川樂(lè)山某豬場(chǎng)。質(zhì)控菌為大腸桿菌ATCC25922，

購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3方法

1.3.1菌液制備將大腸桿菌和沙門氏菌分別接種于10mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)6

h后10倍等比稀釋不同倍數(shù)后接種M-H瓊脂平板，37℃培養(yǎng)16~18h后菌落計(jì)數(shù)，選

擇菌落數(shù)在100~300的平板，計(jì)算菌懸液的濃度，將菌懸液稀釋至106CFU/mL待用。

1.3.2藥液的配制精密稱取乙酰甲喹和恩諾沙星，無(wú)菌操作配制成1024μg/mL的

藥液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?，各貯存液在一周內(nèi)用完。

1.3.3單藥最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定取經(jīng)滅菌過(guò)的

96孔微型反應(yīng)板4塊，采用兩倍稀釋法分別測(cè)定乙酰甲喹和恩諾沙星對(duì)大腸桿菌和沙

門氏菌的最小抑菌濃度。將乙酰甲喹與恩諾沙星各自稀釋到濃度為512、256、128、

64、32、16、8、4、2、1、0.5μg/mL后分別加入96孔板每排的第1~11孔，第12孔作

為陽(yáng)性對(duì)照，各孔分別加入100μL稀釋菌液。每藥做4組稀釋，其中第四組為陰性對(duì)

照。將微孔板置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察，結(jié)果取平均值，求得兩藥的MIC。

從開始有細(xì)菌生長(zhǎng)的前一孔開始向前每孔用接種環(huán)接種試驗(yàn)液于瓊脂平板上，于37℃

下培養(yǎng)24h后觀察，求得MBC。

1.3.4兩藥聯(lián)合對(duì)兩菌株的FIC指數(shù)測(cè)定采用棋盤法測(cè)定兩藥聯(lián)合對(duì)大腸桿菌和

沙門氏菌的體外抗菌活性[4-6]。以單藥MIC試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，設(shè)計(jì)兩藥的4倍、2倍、

1倍、1/2倍、1/4倍和1/8倍MIC進(jìn)行6×6聯(lián)合。將恩諾沙星、乙酰甲喹原液用MH肉湯

稀釋至所需藥物濃度。選取96孔板A-G排的1-7孔作為試驗(yàn)區(qū)域，乙酰甲喹的6個(gè)濃

度由高至低以縱列方式分別從第1縱列至第6縱列加入，每孔50μL，第7縱列作為恩

諾沙星的單藥對(duì)照。恩諾沙星的6個(gè)濃度由高至低以橫排方式分別從A排至F排加入，

每孔50μL，G排作為乙酰甲喹的單藥對(duì)照。恩諾沙星、乙酰甲喹的單藥對(duì)照孔內(nèi)加

入相應(yīng)濃度的藥液100μL。最后各孔加入100μL上述制備的菌懸液，G排第7孔加200

μL菌液，作為陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照。陰性對(duì)照在單獨(dú)的96孔板中進(jìn)行。將96孔板放于37℃

恒溫培養(yǎng)箱，18h后觀察并記錄結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果以FIC指數(shù)作為聯(lián)合藥敏試驗(yàn)判斷依

據(jù)。計(jì)算公式如下：

FIC指數(shù)=

A藥聯(lián)合用藥MIC

A藥單獨(dú)用藥MIC

+

B藥聯(lián)合用藥MIC

B藥單獨(dú)用藥MIC

其中，F(xiàn)IC≤0.5為協(xié)同作用；0.5＜FIC≤1為相加作用；1＜FIC≤2為無(wú)關(guān)作用；

FIC＞2為拮抗作用。

2結(jié)果與分析

2.1乙酰甲喹與恩諾沙星單用對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的MIC值結(jié)果見表1?？梢?/p>

看出，乙酰甲喹和恩諾沙星對(duì)大腸桿菌的抑菌效果均優(yōu)于對(duì)沙門氏菌的抑菌效果，

而對(duì)同種菌株而言，恩諾沙星的抑制效果均優(yōu)于乙酰甲喹。

表1乙酰甲喹、恩諾沙星對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的MIC值μg/mL

藥物

乙酰甲喹

恩諾沙星

將各藥MIC值的前三孔（包括最小抑菌濃度孔）的培養(yǎng)液接種于瓊脂平板上于

37℃下培養(yǎng)24h后觀察，測(cè)定各藥的MBC值，結(jié)果見表2。恩諾沙星和乙酰甲喹對(duì)

兩種菌的殺菌濃度與抑菌濃度相隔很近，所以臨床上二者多用作殺菌藥。

表2乙酰甲喹、恩諾沙星對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的MBC值μg/mL

藥物

乙酰甲喹

恩諾沙星

大腸桿菌

64

16

沙門氏菌

256

32

大腸桿菌

32

8

沙門氏菌

256

16

兩種藥物單獨(dú)用藥的結(jié)果顯示，在對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的體外抑菌試驗(yàn)中，

不論是MIC還是MBC，恩諾沙星均低于乙酰甲喹，在治療有大腸桿菌和沙門氏菌引

起的疾病時(shí)恩諾沙星可能比乙酰甲喹有更好的療效。

2.2聯(lián)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1兩藥聯(lián)用對(duì)大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果乙酰甲喹、恩諾沙星聯(lián)合用藥對(duì)大腸

桿菌的MIC值見表2?？梢钥闯?，當(dāng)乙酰甲喹與恩諾沙星聯(lián)合運(yùn)用時(shí)，乙酰甲喹和恩

諾沙星對(duì)大腸桿菌的MIC分別為8μg/mL和2μg/mL，均小于單獨(dú)藥敏試驗(yàn)時(shí)的MIC。

將所得MIC值代入FIC指數(shù)計(jì)算公式，求得兩藥聯(lián)用對(duì)大腸桿菌的FIC指數(shù)為0.5，表

現(xiàn)為協(xié)同作用。

表2恩諾沙星與乙酰甲喹對(duì)大腸桿菌的聯(lián)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果

乙酰甲喹/(μg·mL-1)

藥物濃度

128

32

16

恩諾沙星

/(μg·mL-1)

8

4

2

1

乙酰甲喹單藥對(duì)照

64321684

單藥對(duì)照

恩諾沙星

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

+

-

-

-

+

+

+

-陽(yáng)性對(duì)照

“+”表示有細(xì)菌生長(zhǎng)；“-”表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)

2.2.2兩藥聯(lián)用對(duì)沙門氏菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果乙酰甲喹、恩諾沙星聯(lián)合用藥對(duì)沙門

氏菌的MIC值測(cè)定結(jié)果見表3。可以看出，當(dāng)乙酰甲喹與恩諾沙星聯(lián)合運(yùn)用時(shí)，乙酰

甲喹和恩諾沙星對(duì)沙門氏菌的MIC分別為64μg/mL和8μg/mL，均小于單獨(dú)藥敏試驗(yàn)

時(shí)的結(jié)果。將所得MIC值代入FIC指數(shù)計(jì)算公式，求得兩藥聯(lián)用對(duì)沙門氏菌的FIC指

數(shù)為0.75，表現(xiàn)為相加作用。

表3恩諾沙星與乙酰甲喹對(duì)沙門氏菌的聯(lián)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果

乙酰甲喹/(μg·mL-1)

藥物濃度

1024

64

32

恩諾沙星

/(μg·mL-1)

16

8

4

2

乙酰甲喹單藥對(duì)照

52

單藥對(duì)照

恩諾沙星

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

+

+

+

-

-

-

+

+

+

陽(yáng)性對(duì)照

“+”表示有細(xì)菌生長(zhǎng)；“-”表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)

3討論

腸道感染是獸醫(yī)臨床中常見的疾病，可由病毒和細(xì)菌感染引起，其中大腸桿菌

和沙門氏菌是引起腸道感染的主要病原，目前針對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌引起的腸道

感染主要采取抗菌藥物來(lái)進(jìn)行治療。但是，獸醫(yī)臨床在使用抗菌藥物時(shí)常常針對(duì)性

不強(qiáng)，濫用藥物現(xiàn)象比較嚴(yán)重，由此帶來(lái)的賴藥性使抗菌藥物的效果越來(lái)越差。同

時(shí)，我國(guó)腸道感染疾病多呈混合感染或者繼發(fā)感染，單一抗感染藥物往往無(wú)法控制

多種病原體混合感染的局面，因此，聯(lián)合用藥已成為克服單一抗感染藥物抗菌范圍

有限而不能有效防治混合感染的缺陷的一種較好方案。

恩諾沙星與乙酰甲喹是獸醫(yī)臨床常用的治療腸道感染的抗菌藥物。恩諾沙星抗

菌譜廣，殺菌活性強(qiáng)，能有效殺死靜止期和生長(zhǎng)期的細(xì)菌，對(duì)多種革蘭氏陰性桿菌

如大腸桿菌、沙門氏菌以及球菌都能起到良好的抗菌效果[8-9]。但是由于使用廣泛其

耐藥性報(bào)道日益增多，特別沙門氏菌的耐藥性比較明顯[2,10-11]。乙酰甲喹對(duì)革蘭陰

性菌作用更強(qiáng)，廣泛用于治療雞或豬的腸道細(xì)菌性疾病[5]。近年來(lái)為了增強(qiáng)抗菌效

果及降低毒性，常將乙酰甲喹與其他藥物聯(lián)合使用。

本實(shí)驗(yàn)采用體外聯(lián)合藥敏的方法考察了恩諾沙星與乙酰甲喹聯(lián)合運(yùn)用對(duì)大腸桿

菌和沙門氏菌的MIC的變化。兩藥單獨(dú)使用時(shí)恩諾沙星和乙酰甲喹對(duì)大腸桿菌和沙

門氏菌的抗菌活性都較強(qiáng)，但恩諾沙星的抗菌效果明顯優(yōu)于乙酰甲喹，是乙酰甲喹

的4~16倍；兩藥對(duì)大腸桿菌的效果也優(yōu)于其對(duì)沙門氏菌的效果，這與部分文獻(xiàn)報(bào)道

的結(jié)果比較一致[2]，只是恩諾沙星與乙酰甲喹對(duì)兩株菌的MIC值跟文獻(xiàn)報(bào)道稍有差

異，這可能跟細(xì)菌的血清型或者區(qū)域用藥習(xí)慣有關(guān)[4,12-13]。恩諾沙星與乙酰甲喹聯(lián)用

對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌臨床株的FIC指數(shù)分別為0.5和0.75，說(shuō)明恩諾沙星和乙酰甲

喹對(duì)兩種菌的抗菌作用呈協(xié)同或者相加效應(yīng)。對(duì)大腸桿菌聯(lián)合應(yīng)用時(shí)恩諾沙星和乙

酰甲喹的MIC均為其單獨(dú)使用時(shí)MIC的1/4，說(shuō)明臨床中兩藥聯(lián)合用于治療由大腸桿

菌引起的疾病時(shí)，在保證治療效果的前提下，可降低恩諾沙星和乙酰甲喹的用量，

降低用藥成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。同樣，在對(duì)沙門氏菌聯(lián)合應(yīng)用時(shí)恩諾沙星的MIC為

其單獨(dú)使用的1/2，乙酰甲喹為其單獨(dú)用藥的1/4，說(shuō)明臨床中兩藥也可以聯(lián)合用于

治療由沙門氏菌引起的疾病。

乙酰甲喹和恩諾沙星都是獸醫(yī)臨床治療中常用的廣譜抗菌藥物，其良好的治療

效果得到廣大獸醫(yī)工作者的好評(píng)。恩諾沙星與乙酰甲喹呈協(xié)同作用，臨床聯(lián)合用藥

時(shí)可以大大減少藥物用量，從而有效防止耐藥菌的產(chǎn)生。同時(shí)，隨著藥物用量的減

少，也可減少藥物在肉食品、土壤和水中的殘留，從而減輕給人畜健康造成傷害。

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