檢測(cè)項(xiàng)目名稱：25-羥基維生素D2/D3檢測(cè)

一、檢測(cè)平臺(tái)介紹（檢測(cè)方法、采樣步驟、檢測(cè)試劑、檢測(cè)儀器）

1、檢測(cè)方法：串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)

VitD(VitaminD)，主要由皮膚經(jīng)紫外線照射合成，具有調(diào)節(jié)鈣磷代謝，防治

兒童佝僂病、骨質(zhì)疏松的重大作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)充足的VitD對(duì)于心血管、糖尿病、腫瘤、

免疫性疾病起到預(yù)防作用。傳統(tǒng)研究認(rèn)為，VitD參與調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝，維持骨骼健康。

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，VitD的作用遠(yuǎn)不止維系骨骼健康那么簡(jiǎn)單，它具有極廣泛的生理功能，

VitD受體存在于身體的大部分組織中，在許多常見(jiàn)病的發(fā)生發(fā)展中，都可見(jiàn)到VitD的影

子，腫瘤、糖尿病、高血壓、心血管疾病和自身免疫性疾病等多種疾病都與VitD缺乏相關(guān)。

VitD(VitaminD)是一種脂溶性維生素，根據(jù)來(lái)源不同可以分為2大類：

?VitD2(麥角鈣化醇)，主要來(lái)源于植物性食物，自身無(wú)法合成。

?VitD3(膽鈣化醇)，主要由皮膚經(jīng)紫外線照射合成，少量來(lái)源于動(dòng)物性食物。

無(wú)論是VitD2還是VitD3都需要經(jīng)過(guò)血液循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，在肝酶的作用下首先轉(zhuǎn)

化為25-羥基維生素D(25(OH)VitD)，25(OH)VitD再轉(zhuǎn)運(yùn)到腎臟，經(jīng)過(guò)第二次羥化形

成1,25(OH)2VitD，二者均能發(fā)生生物作用。

目前國(guó)內(nèi)外血清25OHD的檢測(cè)有傳統(tǒng)方法如放射免疫、競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合法等,也有高效液

相譜、高效液相譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等新興方法。傳統(tǒng)技術(shù)由于方法特異性及抗基質(zhì)干擾能

力較差,且有些方法不能同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定25OHD2和25OHD3的含量,因此無(wú)法準(zhǔn)確反映出血

清25OHD濃度。串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)人血清25OHD,能同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定25OHD2和25OHD3的

濃度,且方法特異性好、抗干擾能力強(qiáng),被公認(rèn)為是檢測(cè)人血清25OHD的金標(biāo)準(zhǔn)。

液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)：兩個(gè)或更多的質(zhì)譜連接在一起，稱為串聯(lián)質(zhì)譜。最簡(jiǎn)單的串聯(lián)

質(zhì)譜（MS/MS）由兩個(gè)質(zhì)譜串聯(lián)而成，其中第一個(gè)質(zhì)量分析器（MS1）將離子預(yù)分離或加

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能量修飾，由第二級(jí)質(zhì)量分析器（MS2）分析結(jié)果。最常見(jiàn)的串聯(lián)質(zhì)譜為四極桿串聯(lián)質(zhì)

譜。第一級(jí)和第四極桿分析器分別為MS1和MS2，第二級(jí)四極桿分析器所起作用是將

從MS1得到的各個(gè)峰進(jìn)行轟擊，實(shí)現(xiàn)母離子碎裂后進(jìn)入MS2再行分析。

MS/MS最基本的功能包括能說(shuō)明MS1中的母離子和MS2中的子離子間的聯(lián)系。根據(jù)

MS1和MS2的掃描模式，如子離子掃描、母離子掃描和中性碎片丟失掃描，可以查明不同

質(zhì)量數(shù)離子間的關(guān)系。

MS/MS在混合物分析中有很多優(yōu)勢(shì)。在質(zhì)譜與氣相譜或液相譜聯(lián)用時(shí)，即使譜

未能將物質(zhì)完全分離，也可以進(jìn)行鑒定。MS/MS可從樣品中選擇母離子進(jìn)行分析，而不受

其他物質(zhì)干擾。

液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)主要用于分析GC-MS/MS不能分析，或熱穩(wěn)定性差，強(qiáng)極

性和高分子量的物質(zhì)，如生物樣品（藥物與其代謝產(chǎn)物）和生物大分子（肽、蛋白、核酸和

多糖）。

液相串聯(lián)質(zhì)譜（LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry）被稱為“分

子天平”，它的出現(xiàn)標(biāo)志了質(zhì)譜技術(shù)在臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作成功普及的開(kāi)始，質(zhì)譜技術(shù)已經(jīng)逐

步發(fā)展成為應(yīng)用廣泛的分析手段，具有超敏性、高特異性、高選擇性和快速檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。

2、樣本送檢流程

醫(yī)生開(kāi)檢驗(yàn)申請(qǐng)單→護(hù)士或檢驗(yàn)采樣，并登記采樣者、采樣日期、采樣時(shí)間等信息→護(hù)

士或檢驗(yàn)將樣本、檢驗(yàn)申請(qǐng)單、交接單交予艾迪康公司物流→當(dāng)?shù)匕峡倒疚锪鲗?/p>

本樣本、檢驗(yàn)申請(qǐng)單、交接單運(yùn)送至上海艾迪康臨床檢驗(yàn)中心

3、樣本采集及要求

①靜脈采血3ml，推薦首選普通血清管分離血清、也可使用EDTA抗凝管（紫蓋）分離血

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漿;

②采血后6小時(shí)內(nèi)采用離心沉淀法（1300g,10min）分離血清，如果不能立即檢測(cè)須將血清

樣本置于2-8度或-20度避光保存;

③樣本運(yùn)輸上海途中需要4度藍(lán)冰運(yùn)輸;

④患者在進(jìn)行鈣和維生素D補(bǔ)充前，必須提前進(jìn)行該項(xiàng)檢測(cè)，服藥期間，每1-3月復(fù)查一次;

4、流動(dòng)相及萃取試劑：進(jìn)口（Sigma/Fluka）試劑，實(shí)驗(yàn)室根據(jù)SOP自配

檢測(cè)試劑盒：(上海復(fù)星)25羥基維生素D2+D3檢測(cè)試劑盒

5、檢測(cè)儀器：

①LC-MS/MSAPI3000②WATERS

二、實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制

25羥基維生素D2+D3項(xiàng)目作為艾迪康近期新開(kāi)展的項(xiàng)目。實(shí)驗(yàn)室依據(jù)ISO15189相關(guān)

體系文件配合參考《化學(xué)藥物臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》建立內(nèi)部質(zhì)量控制文件，

從2014年開(kāi)始，我們選取美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)（CollegeofAmericanPathologists，CAP）

的能力驗(yàn)證活動(dòng)ProficiencyTesting,PT也稱為室間質(zhì)評(píng)）進(jìn)行質(zhì)量控制，在內(nèi)部，嚴(yán)格按

照SOP針對(duì)每次檢測(cè)加入3個(gè)值（高、中、低）的內(nèi)部質(zhì)控以及一個(gè)實(shí)驗(yàn)室盲孔數(shù)據(jù)進(jìn)行

監(jiān)測(cè)。

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